Pāriet uz saturu
RBL-2H3
Audums
Perifērās asinis
Slimība
Žurku leikēmija
Sinonīmi
RBL2H3, RBL 2H3, RBL.2H3

Dokumenti

RBL-2H3

Cell line · Preces numurs 305194

The RBL-2H3 cell line has become a valuable tool for studying mast cell physiology. RBL-2H3 cells express rat mast cell protease II (RMCP-II) and the c-ki...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

RBL-2H3 šūnu līnija ir kļuvusi par vērtīgu rīku tuklo šūnu fizioloģijas pētījumiem. RBL-2H3 šūnas ekspresē žurku tuklo šūnu proteāzi II (RMCP-II) un c-kit receptoru tirozīnkināzi, padarot tās par potenciālu tuklo šūnu modeli. Tomēr par RBL-2H3 šūnām ir saņemti pretrunīgi un dažkārt maldinoši dati.

RBL-2H3 šūnas ir plaši izmantotas, lai pētītu dažādus tuklo šūnu funkcijas aspektus, tostarp degranulāciju, tuklo šūnu stabilizatorus un FceRI receptoru mijiedarbību ar citoskeletu. Tās ekspresē augstas afinitātes IgE receptorus, un tās var tikt aktivētas, lai izdalītu histamīnu un citus mediatorus. RBL-2H3 šūnu kultivēšana ir salīdzinoši vienkārša, un ilgāks kultivēšanas laiks nodrošina lielāku šūnu blīvumu.

RBL-2H3 šūnām, līdzīgi kā tuklajām šūnām un bazofiliem, ir raksturīga degranulācija. Kad alergēni sašuj to IgE saistītos FceRI receptorus, RBL-2H3 šūnas atbrīvo iepriekš sagatavotus un no jauna sintezētus mediatorus, veicinot imūnās alerģiskās reakcijas. RBL-2H3 šūnu degranulācija ir devusi ieskatu arī bazofilu degranulācijā. Šīs šūnas var degranulēt arī, reaģējot uz neimunoloģiskiem stimuliem, un ir atšķirības starp MMC, RBL-2H3 un CTMC.
Kalcija loma RBL-2H3 šūnu degranulācijā ir nozīmīga. Kalcija jonofors A23187, kas paaugstina intracelulāro kalcija līmeni, inducē RBL-2H3 šūnu degranulāciju, līdzīgi kā tuklajās šūnās un bazofilos. Dažos pētījumos RBL-2H3 šūnas ir aprakstītas kā serotonīnu atbrīvojoša šūnu līnija.

Audums
Perifērās asinis
Slimība
Žurku leikēmija
Sinonīmi
  • RBL2H3
  • RBL 2H3
  • RBL.2H3

02Klasifikācija

Organisms
Žurka
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Fibroblasti

04Identifikatori

Atsauce
RBL-2H3 (Cytion kataloga numurs 305194)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10116
Cellosaurus
CVCL_0591

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Šķirne / pasuga
Wistar