Přejít na obsah
RBL-2H3
Tkáň
Periferní krev
Nemoc
Leukémie potkanů
Synonyma
RBL2H3, RBL 2H3, RBL.2H3

Dokumenty

RBL-2H3

Cell line · Číslo výrobku 305194

The RBL-2H3 cell line has become a valuable tool for studying mast cell physiology. RBL-2H3 cells express rat mast cell protease II (RMCP-II) and the c-ki...

€430.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie RBL-2H3 se stala cenným nástrojem pro studium fyziologie žírných buněk. Buňky RBL-2H3 exprimují krysí mastocytární proteázu II (RMCP-II) a receptorovou tyrozinkinázu c-kit, což z nich činí potenciální model mastocytů. O buňkách RBL-2H3 však byly hlášeny rozporuplné a někdy zavádějící údaje.

Buňky RBL-2H3 byly široce používány ke zkoumání různých aspektů funkce žírných buněk, včetně degranulace, stabilizátorů žírných buněk a interakce receptorů FceRI s cytoskeletem. Exprimují vysokoafinitní IgE receptory a mohou být aktivovány k sekreci histaminu a dalších mediátorů. Kultivace buněk RBL-2H3 je poměrně snadná a delší doba kultivace vede k vyšší hustotě buněk.

Klíčovou vlastností buněk RBL-2H3 je degranulace, podobně jako u žírných buněk a bazofilů. Když alergeny zesíťují jejich receptory FceRI vázané na IgE, buňky RBL-2H3 uvolňují předem připravené a nově syntetizované mediátory, což přispívá k imunitním alergickým reakcím. Degranulace buněk RBL-2H3 umožnila nahlédnout také do degranulace bazofilů. Tyto buňky mohou degranulovat i v reakci na neimunologické podněty a mezi MMC, RBL-2H3 a CTMC existují rozdíly.
Významná je úloha vápníku při degranulaci buněk RBL-2H3. Ionofor vápníku A23187, který zvyšuje intracelulární hladinu vápníku, vyvolává degranulace u buněk RBL-2H3, podobně jako u žírných buněk a bazofilů. Některé studie popisují buňky RBL-2H3 jako buněčnou linii uvolňující serotonin.

Tkáň
Periferní krev
Nemoc
Leukémie potkanů
Synonyma
  • RBL2H3
  • RBL 2H3
  • RBL.2H3

02Klasifikace

Organismus
Krysa
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Fibroblasty

04Identifikátory

Citace
RBL-2H3 (katalogové číslo Cytion 305194)
Daňové identifikační číslo NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_0591

05Manipulace a chov

Pěstovací médium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/l NaHCO3, w: EBSS (číslo článku Cytion 820100a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS a 1 % NEAA
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

07Dárce

Plemeno / poddruh
Wistar