RBL-2H3

A linhagem celular RBL-2H3 tornou-se uma ferramenta valiosa para o estudo da fisiologia dos mastócitos. As células RBL-2H3 expressam a protease II dos mastócitos de rato (RMCP-II) e o receptor tirosina quinase c-kit, o que as torna um modelo potencial para os mastócitos. No entanto, foram relatados dados conflitantes e, às vezes, enganosos sobre as células RBL-2H3.

As células RBL-2H3 têm sido amplamente utilizadas para investigar vários aspectos da função dos mastócitos, incluindo a desgranulação, os estabilizadores de mastócitos e a interação dos receptores FceRI com o citoesqueleto. Elas expressam receptores de IgE de alta afinidade e podem ser ativadas para secretar histamina e outros mediadores. O cultivo de células RBL-2H3 é relativamente fácil, e tempos de cultura mais longos resultam em maior densidade celular.

A desgranulação é uma característica fundamental das células RBL-2H3, semelhante à dos mastócitos e basófilos. Quando os alérgenos formam ligações cruzadas com seus receptores FceRI ligados à IgE, as células RBL-2H3 liberam mediadores pré-formados e recém-sintetizados, contribuindo para as respostas imunes alérgicas. A desgranulação das células RBL-2H3 também proporcionou insights sobre a desgranulação dos basófilos. Essas células também podem sofrer desgranulação em resposta a estímulos não imunológicos, e há diferenças entre MMC, RBL-2H3 e CTMC.
O papel do cálcio na desgranulação das células RBL-2H3 é significativo. O ionóforo de cálcio A23187, que aumenta os níveis intracelulares de cálcio, induz a desgranulação nas células RBL-2H3, de forma semelhante aos mastócitos e basófilos. Alguns estudos descreveram as células RBL-2H3 como uma linhagem celular liberadora de serotonina.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.