Preskoči na vsebino
RBL-2H3
Tkivo
Periferna kri
Bolezen
Levkemija podgan
Sinonimi
RBL2H3, RBL 2H3, RBL.2H3

Dokumenti

RBL-2H3

Cell line · Številka izdelka 305194

The RBL-2H3 cell line has become a valuable tool for studying mast cell physiology. RBL-2H3 cells express rat mast cell protease II (RMCP-II) and the c-ki...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija RBL-2H3 je postala dragoceno orodje za preučevanje fiziologije mastocitov. Celice RBL-2H3 izražajo proteazo II (RMCP-II) in receptorsko tirozin kinazo c-kit, zato so potencialni model za mastocite. Vendar so bili o celicah RBL-2H3 sporočeni nasprotujoči si in včasih zavajajoči podatki.

Celice RBL-2H3 se pogosto uporabljajo za raziskovanje različnih vidikov delovanja mastocitov, vključno z degranulacijo, stabilizatorji mastocitov in interakcijo receptorjev FceRI s citoskeletom. Izražajo visoko afinitetne receptorje IgE in se lahko aktivirajo za izločanje histamina in drugih mediatorjev. Gojenje celic RBL-2H3 je razmeroma enostavno, daljši čas gojenja pa omogoča večjo gostoto celic.

Degranulacija je ključna značilnost celic RBL-2H3, podobno kot pri mastocitih in bazofilih. Ko alergeni zamrežijo njihove receptorje FceRI, vezane na IgE, celice RBL-2H3 sproščajo vnaprej pripravljene in na novo sintetizirane mediatorje, kar prispeva k imunskim alergijskim odzivom. Degranulacija celic RBL-2H3 je omogočila vpogled tudi v degranulacijo bazofilov. Te celice se lahko degranulirajo tudi kot odgovor na neimunološke dražljaje, med MMC, RBL-2H3 in CTMC pa obstajajo razlike.
Vloga kalcija pri degranulaciji celic RBL-2H3 je pomembna. Kalcijev ionofor A23187, ki poveča raven znotrajceličnega kalcija, povzroči degranulacijo celic RBL-2H3, podobno kot pri mastocitih in bazofilih. V nekaterih študijah so bile celice RBL-2H3 opisane kot celična linija, ki sprošča serotonin.

Tkivo
Periferna kri
Bolezen
Levkemija podgan
Sinonimi
  • RBL2H3
  • RBL 2H3
  • RBL.2H3

02Razvrstitev

Organizem
Podgana
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Fibroblast

04Identifikatorji

Navajanje vira
RBL-2H3 (kataloška številka Cytion 305194)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_0591

05Ravnanje in gojenje

Gojišče
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (številka izdelka Cytion 820100a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS in 1 % NEAA
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

07Donator

Pasma / podvrsta
Wistar