Μετάβαση στο περιεχόμενο
E11
Ιστός
Νεφρός

Έγγραφα

E11

Cell line · Αριθμός προϊόντος 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Κατασκευάζεται κατόπιν παραγγελίας
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά E11 είναι μια εξαιρετικά εξειδικευμένη κυτταρική σειρά ποντικού που αναπτύχθηκε για προηγμένες μελέτες της λειτουργίας των ποδοκυττάρων και των μηχανισμών νεφρικών παθήσεων. Τα κύτταρα Ε11 προέρχονται από τα σπειράματα διαγονιδιακών ποντικών που έχουν τροποποιηθεί ώστε να εκφράζουν μια ευαίσθητη στη θερμοκρασία παραλλαγή του μεγάλου αντιγόνου Τ SV40 και λειτουργούν υπό τη ρύθμιση του επαγώγιμου από την IFN-g υποκινητή H-2kb. Αυτό το μοναδικό γενετικό πλαίσιο διευκολύνει τον υπό όρους πολλαπλασιασμό των κυττάρων, ο οποίος εξαρτάται από τη θερμοκρασία του περιβάλλοντος και ευθυγραμμίζεται με την ελεγχόμενη έκφραση του αντιγόνου Τ.

Ένα από τα διακριτικά χαρακτηριστικά της κυτταρικής σειράς E11 είναι η φαινοτυπική της σταθερότητα σε εκτεταμένη παθητικοποίηση. Διατηρώντας συνεπή έκφραση και κυτταρικά χαρακτηριστικά σε περισσότερες από 40 διελεύσεις, τα κύτταρα E11 έχουν αποδειχθεί ανεκτίμητα για μακροχρόνιες μελέτες χωρίς το σύνηθες πρόβλημα της φαινοτυπικής μετατόπισης που παρατηρείται σε πολλές καλλιεργούμενες κυτταρικές σειρές. Αυτή η σταθερότητα ενισχύει τη χρήση τους σε επαναλαμβανόμενα και εκτεταμένα βιολογικά πειράματα που απαιτούν συνεπή συμπεριφορά των κυττάρων.

Όσον αφορά την έκφραση πρωτεϊνών, η κυτταρική σειρά E11 παρουσιάζει ένα ισχυρό προφίλ που είναι απαραίτητο για μελέτες που αφορούν ειδικά τα ποδοκύτταρα. Τα κύτταρα εκφράζουν σταθερά τη νεφρίνη, ένα βασικό συστατικό της δομής του σχισμοειδούς διαφράγματος στα ποδοκύτταρα, μαζί με μια ποικιλία άλλων ειδικών για τα ποδοκύτταρα πρωτεϊνών, όπως η ποδοκίνη, το CD2AP και η συναπτοποδίνη. Αυτή η ολοκληρωμένη έκφραση πρωτεϊνών διευκολύνει τη μελέτη της βιολογίας των ποδοκυττάρων σε ένα ελεγχόμενο in vitro περιβάλλον, που προσομοιάζει στενά τις in vivo συνθήκες. Η ικανότητα των κυττάρων E11 να σχηματίζουν εκτεταμένες επαφές κυττάρου-κυττάρου υπογραμμίζει περαιτέρω την καταλληλότητά τους για τη μοντελοποίηση των λειτουργιών του φραγμού διήθησης των νεφρών.

Ιστός
Νεφρός

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Ποντίκι
Σεξ
Μη καθορισμένο
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Τύπος κυττάρου
Ποδοκύτταρα

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
E11 (αριθμός καταλόγου Cytion 400494)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
10090
Κελλοσαύρος
CVCL_5737

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
WT1, Lmx1b, νεφρίνη, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 και GAPDH.

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
RPMI 1640, w: 2,0 mM σταθερής γλουταμίνης, w: 2,0 g/L NaHCO3 (αριθμός άρθρου Cytion 820700a)
Ατμόσφαιρα επώασης

33°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
Εμβολιάστε φιάλες καλλιέργειας κυττάρων T75 με 1x 104 κύτταρα/cm2 για τη διαδικασία πολλαπλασιασμού. Διατηρήστε τα κύτταρα σε θερμοκρασία 33 βαθμών Κελσίου / 5% CO2, έως ότου η φιάλη είναι περίπου 75% συμπυκνωμένη.
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Φυλή / υποείδος
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
Ηλικία δωρητή
Ενηλίκων