Gå direkte til indholdet
E11
Væv
Nyre

Dokumenter

E11

Cell line · Varenummer 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

€800.00ekskl. moms og fragt

Tilpasning / Anbefalinger

Fremstillet på bestilling
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

E11-cellelinjen er en højt specialiseret murin cellelinje, der er udviklet til avancerede undersøgelser af podocytfunktion og nyresygdomsmekanismer. E11-cellerne stammer fra glomeruli fra transgene mus, der er konstrueret til at udtrykke en temperaturfølsom variant af SV40 large T-antigenet, og de fungerer under regulering af den IFN-g-inducerbare H-2kb-promotor. Denne unikke genetiske ramme muliggør en betinget spredning af cellerne, som er afhængig af omgivelsernes temperatur, hvilket stemmer overens med det kontrollerede udtryk af T-antigenet.

Et af de særlige kendetegn ved E11-cellelinjen er dens fænotypiske stabilitet på tværs af omfattende passage. E11-cellerne opretholder et ensartet udtryk og cellulære egenskaber gennem mere end 40 passager og har vist sig at være uvurderlige til langtidsstudier uden det almindelige problem med fænotypisk drift, der ses i mange dyrkede cellelinjer. Denne stabilitet forbedrer deres anvendelse i gentagne og udvidede biologiske eksperimenter, der kræver ensartet celleadfærd.

Med hensyn til proteinudtryk udviser E11-cellelinjen en robust profil, der er afgørende for podocytspecifikke undersøgelser. Cellerne udtrykker konsekvent nephrin, en væsentlig komponent i podocytternes spaltestruktur, sammen med en række andre podocytspecifikke proteiner som podocin, CD2AP og synaptopodin. Dette omfattende proteinudtryk gør det muligt at studere podocytbiologi i et kontrolleret in vitro-miljø, der nøje simulerer in vivo-forhold. E11-cellernes evne til at danne omfattende celle-celle-kontakter understreger yderligere deres egnethed til modellering af nyrernes filtreringsbarrierefunktioner.

Væv
Nyre

02Klassificering

Organisme
Mus
Køn
Uspecificeret
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Celletype
Podocyt

04Identifikatorer

Kildehenvisning
E11 (Cytion katalognummer 400494)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5737

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
WT1, Lmx1b, nephrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 og GAPDH.

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
RPMI 1640, m: 2,0 mM stabil glutamin, m: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosfære

33 °C, 5 %CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Såtæthed
Inokulér T75-cellekulturflasker med 1x 104 celler/cm2 til proliferationsprocessen. Opbevar cellerne ved 33 grader Celsius / 5 % CO2, indtil flasken er ca. 75 % konfluent.
Væskeudskiftning
2 til 3 gange om ugen
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Race / underart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
Donorens alder
Voksen