Gå direkt till innehållet
E11
Vävnad
Njurar

E11

Cell line · Produktnummer 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Tillverkas på beställning
1

01Allmän information

Beskrivning

E11-cellinjen är en högspecialiserad cellinje från möss som utvecklats för avancerade studier av podocytfunktion och mekanismer bakom njursjukdomar. E11-cellerna härstammar från glomeruli hos transgena möss som konstruerats för att uttrycka en temperaturkänslig variant av SV40 Large T-antigen och regleras av den IFN-g-inducerbara H-2kb-promotorn. Detta unika genetiska ramverk möjliggör en villkorad proliferation av cellerna, beroende på miljötemperaturen, vilket överensstämmer med det kontrollerade uttrycket av T-antigenet.

En av de utmärkande egenskaperna hos E11-cellinjen är dess fenotypiska stabilitet efter omfattande passering. E11-cellerna bibehåller samma uttryck och cellulära egenskaper genom mer än 40 passager och har visat sig vara ovärderliga för långtidsstudier utan det vanliga problemet med fenotypisk drift som förekommer hos många odlade cellinjer. Denna stabilitet förbättrar deras användning i upprepade och utökade biologiska experiment som kräver konsekvent cellbeteende.

När det gäller proteinuttryck uppvisar E11-cellinjen en robust profil som är helt nödvändig för podocytspecifika studier. Cellerna uttrycker konsekvent nefrin, en viktig komponent i podocyternas slitsmembranstruktur, tillsammans med en mängd andra podocytspecifika proteiner som podocin, CD2AP och synaptopodin. Detta omfattande proteinuttryck underlättar studier av podocyternas biologi i en kontrollerad in vitro-miljö, som nära simulerar in vivo-förhållanden. E11-cellernas förmåga att bilda omfattande cell-cellkontakter understryker ytterligare deras lämplighet för modellering av barriärfunktioner för njurfiltrering.

Vävnad
Njurar

02Klassificering

Organism
Mus
Kön
Ospecificerat
Tillväxtegenskaper
Följsam
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Celltyp
Podocyt

04Identifierare

Källa
E11 (Cytion katalognummer 400494)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5737

05Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
WT1, Lmx1b, nefrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 och GAPDH.

06Hantering och odling

Odlingsmedium
RPMI 1640, med: 2,0 mM stabilt glutamin, med: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosfär

33°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
Inokulera T75-cellodlingsflaskor med 1x 104 celler/cm2 för proliferationsprocessen. Håll cellerna vid 33 grader Celsius / 5 % CO2 tills flaskan är ungefär 75 % konfluent.
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Ras / underart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
Donatorns ålder
Vuxen