الانتقال إلى المحتوى
E11
الأنسجة
الكلى

المستندات

E11

Cell line · رقم المنتج 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن

التخصيص / التوصيات

حسب الطلب
1

01معلومات عامة

الوصف

خط الخلايا E11 هو خط خلايا الفئران عالي التخصص الذي تم تطويره لإجراء دراسات متقدمة في وظيفة الخلايا الكبيبية وآليات أمراض الكلى. تعمل خلايا E11، المشتقة من كبيبات الفئران المعدلة وراثياً والمعدلة وراثياً للتعبير عن متغير حساس لدرجة الحرارة من مستضد SV40 الكبير، تحت تنظيم محفز H-2kb المحرض على إنزيم H-2kb. ويسهّل هذا الإطار الجيني الفريد من نوعه تكاثر الخلايا المشروط، الذي يعتمد على درجة الحرارة البيئية، وهو ما يتماشى مع التعبير المتحكم به لمستضد T.

تتمثل إحدى السمات المميزة لخط الخلايا E11 في ثبات النمط الظاهري عبر الترحيل المكثف. وقد أثبتت خلايا E11، التي تحافظ على ثبات تعبيرها وخصائصها الخلوية عبر أكثر من 40 ممرًا، أنها لا تقدر بثمن للدراسات طويلة الأمد دون أن تواجه مشكلة شائعة تتمثل في انحراف النمط الظاهري الذي يظهر في العديد من خطوط الخلايا المستزرعة. ويعزز هذا الثبات من استخدامها في التجارب البيولوجية المتكررة والممتدة التي تتطلب سلوكًا خلويًا متسقًا.

فيما يتعلق بالتعبير البروتيني، يُظهر خط خلايا E11 مظهرًا قويًا لا غنى عنه للدراسات الخاصة بالخلايا البودوسيتية. تعبر الخلايا باستمرار عن النيفرين، وهو عنصر أساسي في بنية الحجاب الحاجز الشقي في الخلايا البودوسية، إلى جانب مجموعة متنوعة من البروتينات الأخرى الخاصة بالخلايا البودوسية، مثل البودوسين وCD2AP وSynaptopodin. يسهّل هذا التعبير البروتيني الشامل دراسة بيولوجيا البودوسيتات في بيئة مخبرية خاضعة للتحكم في بيئة مخبرية تحاكي عن كثب الظروف في الجسم الحي. وتؤكد قدرة خلايا E11 على تشكيل اتصالات واسعة النطاق بين الخلايا الخلوية على ملاءمتها لنمذجة وظائف حاجز الترشيح الكلوي.

الأنسجة
الكلى

02التصنيف

كائن حي
الماوس
الجنس
غير محدد
خصائص النمو
الملتزم
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1
تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

نوع الخلية
بودوسيت

04المعرّفات

المرجع
E11 (كتالوج سيتيون رقم الكتالوج 400494)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
10090
سيلوصور
CVCL_5737

05التعبير والقابلية للإصابة

التعبير البروتيني
WT1، وLmx1b، وLmx1b، وNephrin، وNepHI، وFAT، وP-cadherin، وCD2AP، وZO-I، وPodocalyxin، وPodoplanin، وSynpo، وPodocin، وTRPC6، وGAPDH.

06التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
RPMI 1640، ث: 2.0 مللي مولار جلوتامين مستقر، ث: 2.0 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820700a من سايتيون)
بيئة الحضانة

33 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
قم بتزويد الوسط ب 10٪ من ال FBS
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
كثافة البذر
قم بتلقيح قوارير زراعة الخلايا T75 بـ 1x 104 خلية/سم2 لعملية التكاثر. حافظ على الخلايا عند درجة حرارة 33 درجة مئوية / 5٪ ثاني أكسيد الكربون، حتى تصل القارورة إلى حوالي 75٪ من التكاثر.
تجديد السوائل
2 إلى 3 مرات في الأسبوع
إذابة الثلج والزراعة
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

08المانح

السلالة / النوع الفرعي
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
عمر المتبرع
للبالغين