Mine otse sisu juurde
E11
Kude
Neerud

Dokumendid

E11

Cell line · Toote number 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

E11 rakuliin on kõrgelt spetsialiseerunud hiirte rakuliin, mis on välja töötatud podotsüütide funktsiooni ja neeruhaiguste mehhanismide täiustatud uuringuteks. E11 rakud on saadud transgeensete hiirte glomerulidest, mis on konstrueeritud ekspresseerima SV40 suure T antigeeni temperatuuritundlikku varianti, ja nad töötavad IFN-g-indutseeritava H-2kb promootori reguleerimisel. See ainulaadne geneetiline raamistik hõlbustab rakkude tingimuslikku proliferatsiooni, mis sõltub keskkonna temperatuurist, mis on kooskõlas T-antigeeni kontrollitud ekspressiooniga.

Üks E11 rakuliini iseloomulikke omadusi on selle fenotüüpne stabiilsus ulatusliku passageerimise ajal. E11 rakud säilitavad järjepideva ekspressiooni ja rakkude omadusi rohkem kui 40 passage'i kaudu, mistõttu on nad osutunud hindamatuks pikaajaliste uuringute jaoks ilma fenotüüpide triivimise probleemita, mida on täheldatud paljude kultiveeritud rakuliinide puhul. Selline stabiilsus parandab nende kasutamist korduvates ja pikaajalistes bioloogilistes katsetes, mis nõuavad rakkude järjepidevat käitumist.

E11 rakuliinil on valkude ekspressiooni osas tugev profiil, mis on podotsüütide-spetsiifiliste uuringute jaoks hädavajalik. Need rakud ekspresseerivad järjekindlalt nefriini, mis on podotsüütide lõhede diafragmastruktuuri oluline komponent, koos mitmete teiste podotsüütidele omaste valkude, nagu podotsiin, CD2AP ja sünaptopodiin, kõrval. Selline ulatuslik valkude ekspressioon hõlbustab podotsüütide bioloogia uurimist kontrollitud in vitro keskkonnas, mis simuleerib lähedalt in vivo tingimusi. E11 rakkude võime moodustada ulatuslikke raku-rakukontakte rõhutab veelgi nende sobivust neerufiltratsiooni barjääri funktsioonide modelleerimiseks.

Kude
Neerud

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Määratlemata
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Rakutüüp
Podotsüüdid

04Tunnused

Viide
E11 (Cytioni katalooginumber 400494)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_5737

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Valgu ekspressioon
WT1, Lmx1b, nefriin, NEPHI, FAT, P-kadheriin, CD2AP, ZO-I, podokalüksin, podoplaniin, sünpo, podokiin, TRPC6 ja GAPDH.

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

33°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
Inokuleerige T75 rakukultuuri kolvid 1x 104 rakuga/cm2 proliferatsiooni protsessi jaoks. Hoidke rakke 33 °C juures / 5% CO2, kuni kolv on umbes 75% konfluentne.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
Doonori vanus
Täiskasvanud