Přejít na obsah
E11
Tkáň
Ledviny

Dokumenty

E11

Cell line · Číslo výrobku 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

€800.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Na zakázku
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie E11 je vysoce specializovaná myší buněčná linie vyvinutá pro pokročilé studie funkce podocytů a mechanismů onemocnění ledvin. Buňky E11, odvozené z glomerulů transgenních myší, které byly upraveny tak, aby exprimovaly teplotně citlivou variantu velkého T antigenu SV40, pracují pod regulací promotoru H-2kb indukovaného IFN-g. Tento jedinečný genetický rámec usnadňuje podmíněnou proliferaci buněk v závislosti na teplotě prostředí, což je v souladu s řízenou expresí antigenu T.

Jedním z charakteristických rysů buněčné linie E11 je její fenotypová stabilita při rozsáhlém pasážování. Buňky E11 si zachovávají konzistentní expresi a buněčné vlastnosti po více než 40 pasážích, a proto se ukázaly jako neocenitelné pro dlouhodobé studie bez běžného problému fenotypového driftu, který se vyskytuje u mnoha kultivovaných buněčných linií. Tato stabilita zlepšuje jejich použití v opakovaných a dlouhodobých biologických experimentech vyžadujících konzistentní chování buněk.

Pokud jde o expresi proteinů, buněčná linie E11 vykazuje robustní profil, který je nezbytný pro studie specifické pro podocyty. Buňky důsledně exprimují nefrin, základní součást struktury štěrbinové membrány v podocytech, spolu s řadou dalších proteinů specifických pro podocyty, jako je podocin, CD2AP a synaptopodin. Tato komplexní exprese proteinů usnadňuje studium biologie podocytů v kontrolovaném prostředí in vitro, které věrně simuluje podmínky in vivo. Schopnost buněk E11 vytvářet rozsáhlé buněčné kontakty dále podtrhuje jejich vhodnost pro modelování funkcí filtrační bariéry ledvin.

Tkáň
Ledviny

02Klasifikace

Organismus
Myš
Sex
Nespecifikováno
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GMO
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Typ buňky
Podocyty

04Identifikátory

Citace
E11 (katalogové číslo Cytion 400494)
Daňové identifikační číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5737

05Exprese a náchylnost

Exprese proteinů
WT1, Lmx1b, nefrin, NEPHI, FAT, P-kadherin, CD2AP, ZO-I, podokalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 a GAPDH.

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilní glutamin, w: 2,0 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubační atmosféra

33 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
Naočkujte kultivační lahve s buňkami T75 v množství 1x 104 buněk/cm2 pro proces proliferace. Udržujte buňky při teplotě 33 °C / 5 % CO2, dokud není lahev asi z 75 % konfluentní.
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Plemeno / poddruh
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
Věk dárce
Dospělí