Siirry sisältöön
Caco-2-solut
Kudos
Paksusuoli
Sairaus
Adenokarsinooma
Synonyymit
CaCo-2, CACO-2, Caco 2, CACO 2, CACO2, CaCo2, CaCO2, Caco2, Caco-II

Asiakirjat

Caco-2-solut

Cell line · Tuotenumero 300137

Caco-2-solut toimivat edistyneenä in vitro -mallina ihmisen suoliston esteelle, mikä johtuu pääasiassa siitä, että ne erilaistuvat solumonokerrokseksi, joka sulkee...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

Caco-2-solut toimivat kehittyneenä in vitro -mallina ihmisen suolistoesteelle, mikä johtuu pääasiassa siitä, että ne erilaistuvat solukerrokseksi, joka muistuttaa läheisesti ohutsuolta vuorivia enterosyyttejä. Kun Caco-2-solulinjaa viljellään kudosviljelysuodatinlevyillä, joissa on polykarbonaattisuodattimet, Caco-2-solut erilaistuvat spontaanisti. Caco2-solujen erilaistuminen johtaa erikoistuneiden solutyyppien ilmentymiseen mikrovillien, entsyymien ja kuljettajien kera, mikä vastaa in vivo -tilanteessa esiintyviä monimutkaisia ominaisuuksia ja mekanismeja.

Suoliston imeytymistutkimusmallien yhteydessä Caco-2-solut, jotka on saatu ihmisen paksusuolen adenokarsinoomapotilaasta, ovat tärkeitä, koska ne kykenevät kehittämään korkeita TEER-arvoja, mikä merkitsee ehjiä tiukkoja yhteyksiä ja epiteelin esteen toimintaa. Nämä ominaisuudet ovat ratkaisevan tärkeitä kolesterolin efflux-testin kaltaisissa määrityksissä ja solukuljetuksen tutkimisessa, mukaan lukien lipidin nanohiukkasten liikkuminen ja proteiinien vuorovaikutusten havaitseminen.

Caco-2-solut ovat keskeisiä suolen imeytymistutkimuksissa, sillä ne tarjoavat luotettavan in vitro -lähestymistavan suolen epiteelille. Nämä suolen enterosyyttejä jäljittelevät solut helpottavat suun kautta tapahtuvan lääkeaineen imeytymisen analysointia simuloimalla suolistoesteen toimintaa. Tutkijat käyttävät Caco-2-soluja ennustamaan, miten aineet läpäisevät suolen limakalvon, mikä on välttämätöntä suun kautta otettavien lääkkeiden farmakokineettisessä profiloinnissa. Lisäksi ne ovat keskeinen väline tutkittaessa suoliston kolesterolin ottoa, homeostaasia ja kuljetusta, jotka ovat elintärkeitä prosesseja lipidimetabolian ja siihen liittyvien sairauksien ymmärtämiseksi.

Caco-2-solut ovat edelleen paksusuolen karsinooman ja toksikologian tutkimuksen kulmakivi, ei ainoastaan siksi, että ne ovat merkityksellisiä ihmisen ruoansulatuskanavan tutkimuksissa, vaan myös siksi, että ne tarjoavat yksityiskohtaista tietoa sappireitistä, ksenobioottien aineenvaihdunnasta paksusuolessa, syövästä ja toksikologisesta tutkimuksesta.

Kudos
Paksusuoli
Sairaus
Adenokarsinooma
Sovellukset
GI (ruoansulatuskanavan) malli, jossa mitataan trans-epiteliaalinen/endoteeliaalinen sähköinen resistanssi (TEER). Caco-2-solut kehittävät korkeita TEER-arvoja, jopa 2000 cm2 (mitattuna CLS:llä CellZscope-laitteella, nanoAnalytics, Münster, Saksa).
Synonyymit
  • CaCo-2
  • CACO-2
  • Caco 2
  • CACO 2
  • CACO2
  • CaCo2
  • CaCO2
  • Caco2
  • Caco-II

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä. Muodostavat kohtalaisen hyvin erilaistuneita adenokarsinoomia, jotka ovat sopusoinnussa paksusuolen primaarin kanssa (aste II)
Ploidisuus
(P14), hypertetraploidinen
MSI-tila
Vakaa (MSS)
Kaksinkertaistumisaika
60-70 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
CaCo-2 (Cytionin luettelonumero 300137)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_0025

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
Lämpöstabiili enterotoksiini (Sta, E. coli), epiderminen kasvutekijä (EGF), retinohappoa sitova proteiini I ja retinolia sitova proteiini II, keratiini positiivinen.
Antigeenin ilmentyminen
Veriryhmä O, Rh+, HLA-luokka II negatiivinen
Isoentsyymit
Me-2, 1, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1, G6PD, B.
Virusten kestävyys
Ihmisen immuunikatovirus (HIV, LAV)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2 tuottaa 90 %:n konfluenttisen monokerroksen noin 4 päivässä.
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
72 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen