Kératinocytes épidermiques humains

Les kératinocytes épidermiques humains (HEK) sont des cellules épithéliales primaires isolées à partir de l'épiderme de la peau humaine, généralement obtenues à partir du prépuce néonatal ou du tissu cutané adulte. Ces cellules représentent le type cellulaire prédominant de l'épiderme et sont responsables de la formation, du maintien et de la régénération de l'épithélium squameux stratifié. In vitro, les HEK présentent une morphologie caractéristique en pavés lorsqu'elles sont cultivées dans des conditions de faible teneur en calcium qui favorisent un état prolifératif de type basal. En cas d'augmentation du calcium ou de conditions induisant la différenciation, elles subissent un programme bien défini de stratification et de différenciation terminale, reproduisant les aspects clés du développement épidermique.

Comme les HEK conservent de nombreuses caractéristiques physiologiques de l'épiderme natif, elles sont largement utilisées dans les cultures monocouches 2D ainsi que dans les équivalents cutanés organotypiques 3D avancés qui reproduisent la stratification épidermique et la formation d'une barrière. En tant que cellules primaires, elles ont une durée de vie limitée et une capacité proliférative restreinte, et leur phénotype peut varier en fonction de la source du donneur et des conditions de culture. Par conséquent, un contrôle minutieux du nombre de passages et de l'état de différenciation est essentiel pour la reproductibilité expérimentale et pour la modélisation de la biologie cutanée normale et des processus pathologiques dermatologiques.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie