Човешки епидермални кератиноцити

Човешките епидермални кератиноцити (HEK) са първични епителни клетки, изолирани от епидермиса на човешката кожа, обикновено получени от препуциума на новородени или от кожна тъкан на възрастни. Тези клетки представляват преобладаващия тип клетки в епидермиса и са отговорни за образуването, поддържането и регенерацията на стратифицирания плосък епител. In vitro, HEKs проявяват характерна морфология на калдъръм, когато се култивират в условия на ниско калциево съдържание, които поддържат пролиферативно, базално състояние. При повишаване на калциевото съдържание или условия, предизвикващи диференциация, те преминават през добре дефинирана програма на стратификация и терминална диференциация, като рекапитулират ключови аспекти на епидермалното развитие.

Тъй като HEK поддържат много физиологични характеристики на естествения епидермис, те се използват широко в 2D монослойни култури, както и в усъвършенствани 3D органотипни кожни еквиваленти, които възпроизвеждат епидермалната стратификация и образуването на бариера. Като първични клетки, те имат ограничен живот и ограничена пролиферативна способност, а фенотипът им може да варира в зависимост от източника на донора и условията на култивиране. Следователно, внимателният контрол на броя на пасажите и състоянието на диференциация е от съществено значение за възпроизводимостта на експериментите и за моделирането на нормалната биология на кожата и дерматологичните заболявания.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация