Človeški epidermalni keratinociti

Človeški epidermalni keratinociti (HEK) so primarne epitelne celice, izolirane iz epidermisa človeške kože, ki se običajno pridobivajo iz novorojenčkove kožice ali odraslega kožnega tkiva. Te celice predstavljajo prevladujoč tip celic epidermisa in so odgovorne za nastanek, vzdrževanje in regeneracijo stratificiranega skvamoznega epitelija. In vitro HEK-i kažejo značilno morfologijo tlakovcev, ko se gojijo v pogojih z nizko vsebnostjo kalcija, ki podpirajo proliferativno, bazalno podobno stanje. Ob povišanju kalcija ali pogojih, ki spodbujajo diferenciacijo, se podvržejo dobro opredeljenemu programu stratifikacije in terminalne diferenciacije, ki povzema ključne vidike razvoja epidermisa.

Ker HEK ohranjajo številne fiziološke lastnosti naravne povrhnjice, se pogosto uporabljajo v 2D enoplastnih kulturah ter v naprednih 3D organotipskih kožnih ekvivalentih, ki reproducirajo stratifikacijo povrhnjice in nastajanje pregrade. Kot primarne celice imajo omejeno življenjsko dobo in omejeno sposobnost proliferacije, njihov fenotip pa se lahko razlikuje glede na vir darovalca in pogoje gojenja. Zato je skrbno nadzorovanje števila prehodov in stanja diferenciacije bistveno za reproduktivnost eksperimentov in za modeliranje normalne biologije kože in dermatoloških bolezenskih procesov.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo