İnsan Epidermal Keratinositleri

İnsan Epidermal Keratinositleri (HEK'ler), insan derisinin epidermisinden izole edilen birincil epitel hücreleridir ve genellikle yenidoğan sünnet derisinden veya yetişkin deri dokusundan elde edilir. Bu hücreler, epidermisin baskın hücre tipini temsil eder ve tabakalı skuamöz epitelin oluşumu, bakımı ve yenilenmesinden sorumludur. İn vitro olarak, HEK'ler, proliferatif, bazal benzeri bir durumu destekleyen düşük kalsiyum koşulları altında kültürlendiğinde karakteristik bir parke taşı morfolojisi sergilerler. Kalsiyum artışında veya farklılaşmayı indükleyen koşullarda, epidermal gelişimin temel özelliklerini özetleyen, iyi tanımlanmış bir tabakalaşma ve terminal farklılaşma programından geçerler.

HEK'ler, doğal epidermisin birçok fizyolojik özelliğini korudukları için, epidermal tabakalaşma ve bariyer oluşumunu yeniden üreten gelişmiş 3D organotipik cilt eşdeğerlerinin yanı sıra 2D tek tabaka kültürlerinde de yaygın olarak kullanılırlar. Birincil hücreler olarak, sınırlı bir ömre ve sınırlı proliferatif kapasiteye sahiptirler ve fenotipleri, donör kaynağına ve kültür koşullarına bağlı olarak değişebilir. Bu nedenle, geçiş sayısı ve farklılaşma durumunun dikkatli bir şekilde kontrol edilmesi, deneylerin tekrarlanabilirliği ve normal cilt biyolojisi ile dermatolojik hastalık süreçlerinin modellenmesi için çok önemlidir.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın