Lidské epidermální keratinocyty

Lidské epidermální keratinocyty (HEK) jsou primární epiteliální buňky izolované z epidermis lidské kůže, obvykle získané z předkožky novorozence nebo z tkáně kůže dospělého člověka. Tyto buňky představují převládající typ buněk epidermis a jsou zodpovědné za tvorbu, udržování a regeneraci vrstevnatého dlaždicového epitelu. In vitro vykazují HEK charakteristickou morfologii dlažebních kostek, jsou-li kultivovány v podmínkách s nízkým obsahem vápníku, které podporují proliferativní, bazální stav. Po zvýšení hladiny vápníku nebo v podmínkách indukujících diferenciaci procházejí dobře definovaným programem stratifikace a terminální diferenciace, který rekapituluje klíčové aspekty vývoje epidermis.

Protože HEK zachovávají mnoho fyziologických charakteristik přirozené epidermis, jsou široce používány v 2D monovrstevných kulturách i v pokročilých 3D organotypických ekvivalentech kůže, které reprodukují stratifikaci epidermis a tvorbu bariéry. Jako primární buňky mají omezenou životnost a omezenou proliferační schopnost a jejich fenotyp se může lišit v závislosti na zdroji dárce a kultivačních podmínkách. Proto je pečlivá kontrola počtu pasáží a stavu diferenciace nezbytná pro reprodukovatelnost experimentů a pro modelování normální biologie kůže a dermatologických onemocnění.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení