Inimese epidermise keratinotsüüdid

Inimese epidermaalse keratinotsüüdid (HEK) on primaarse epiteelirakud, mis on isoleeritud inimese naha epidermisest, tavaliselt saadakse need vastsündinu eesnahast või täiskasvanu nahakudedest. Need rakud on epidermise peamine rakutüüp ja vastutavad kihilise lamerakk-epiteeli moodustumise, säilitamise ja uuenemise eest. In vitro näitavad HEK-id iseloomulikku munakivimorfoloogiat, kui neid kasvatatakse madala kaltsiumitasemega tingimustes, mis soodustavad proliferatiivset, basaalse sarnast seisundit. Kaltsiumitaseme tõusu või diferentseerumist indutseerivate tingimuste korral läbivad nad hästi määratletud kihistumise ja terminaalse diferentseerumise programmi, mis kordab epidermise arengu peamisi aspekte.

Kuna HEK-rakud säilitavad paljud loomuliku epidermise füsioloogilised omadused, kasutatakse neid laialdaselt 2D-monokihikultuurides ning ka arenenud 3D-organotüüpsetes nahavastastes ekvivalentides, mis reprodutseerivad epidermise kihistumist ja barjääri moodustumist. Esmasrakkudena on neil piiratud eluiga ja proliferatiivne võime ning nende fenotüüp võib varieeruda sõltuvalt doonori allikast ja kultiveerimistingimustest. Seetõttu on eksperimentide reprodutseeritavuse ja normaalse naha bioloogia ning dermatoloogiliste haiguste protsesside modelleerimise seisukohalt oluline hoolikalt kontrollida passaažide arvu ja diferentseerumise seisundit.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest