Ludzkie keratynocyty naskórka

Ludzkie keratynocyty naskórkowe (HEK) to pierwotne komórki nabłonkowe izolowane z naskórka ludzkiej skóry, zazwyczaj pozyskiwane z napletka noworodków lub tkanki skóry dorosłych. Komórki te stanowią dominujący typ komórek naskórka i są odpowiedzialne za tworzenie, utrzymanie i regenerację nabłonka płaskiego warstwowego. W warunkach in vitro komórki HEK wykazują charakterystyczną morfologię brukowatą, gdy są hodowane w warunkach niskiego stężenia wapnia, które sprzyjają proliferacji i stanowi podobnemu do podstawowego. Po podwyższeniu stężenia wapnia lub w warunkach indukujących różnicowanie komórki przechodzą dobrze zdefiniowany proces warstwowania i różnicowania końcowego, odtwarzając kluczowe aspekty rozwoju naskórka.

Ponieważ komórki HEK zachowują wiele cech fizjologicznych naturalnego naskórka, są szeroko stosowane w hodowlach jednowarstwowych 2D, a także w zaawansowanych trójwymiarowych organotypowych odpowiednikach skóry, które odtwarzają warstwowość naskórka i tworzenie bariery. Jako komórki pierwotne mają one ograniczoną żywotność i zdolność proliferacyjną, a ich fenotyp może się różnić w zależności od źródła dawcy i warunków hodowli. Dlatego też staranne kontrolowanie liczby pasażów i stanu różnicowania ma zasadnicze znaczenie dla powtarzalności eksperymentów oraz modelowania normalnej biologii skóry i procesów chorób dermatologicznych.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym