Human Epidermal Keratinocytes

เซลล์เคราติโนไซต์ของผิวหนังชั้นนอกมนุษย์ (HEKs) เป็นเซลล์เยื่อบุผิวปฐมภูมิที่แยกได้จากผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ โดยทั่วไปได้มาจากหนังหุ้มปลายอวัยวะเพศของทารกแรกเกิดหรือเนื้อเยื่อผิวหนังของผู้ใหญ่ เซลล์เหล่านี้เป็นเซลล์ชนิดหลักของผิวหนังชั้นนอกและมีหน้าที่ในการสร้าง รักษา และฟื้นฟูเยื่อบุผิวแบบหลายชั้น ในหลอดทดลอง เซลล์ HEKs จะแสดงลักษณะรูปร่างคล้ายก้อนหินปูถนนเมื่อเพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะแคลเซียมต่ำ ซึ่งสนับสนุนสภาวะการเพิ่มจำนวนแบบพื้นฐาน เมื่อมีการเพิ่มแคลเซียมหรือสภาวะที่กระตุ้นการแตกต่าง เซลล์จะผ่านกระบวนการที่ชัดเจนของการจัดเรียงเป็นชั้นและการแตกต่างขั้นสุดท้าย ซึ่งจำลองลักษณะสำคัญของการพัฒนาของผิวหนังชั้นนอก

เนื่องจาก HEKs ยังคงลักษณะทางสรีรวิทยาหลายประการของผิวหนังแท้ พวกมันจึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการเพาะเลี้ยงแบบชั้นเดียว 2 มิติ รวมถึงการสร้างผิวหนังเทียมแบบออร์แกนโนไทป์ 3 มิติขั้นสูงที่สามารถจำลองการเรียงชั้นของผิวหนังแท้และการสร้างเกราะป้องกันได้ ในฐานะเซลล์ปฐมภูมิ พวกมันมีอายุขัยจำกัดและความสามารถในการแบ่งตัวที่จำกัด และลักษณะทางฟีโนไทป์ของพวกมันอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของผู้บริจาคและสภาพการเพาะเลี้ยง ดังนั้น การควบคุมจำนวนรุ่นและการแยกแยะอย่างรอบคอบจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อความสามารถในการทำซ้ำของการทดลองและการจำลองชีววิทยาผิวหนังปกติและกระบวนการของโรคผิวหนัง

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.