Queratinócitos epidérmicos humanos

Os queratinócitos epidérmicos humanos (HEKs) são células epiteliais primárias isoladas da epiderme da pele humana, normalmente obtidas do prepúcio neonatal ou do tecido cutâneo adulto. Estas células representam o tipo celular predominante da epiderme e são responsáveis pela formação, manutenção e regeneração do epitélio escamoso estratificado. In vitro, os HEK apresentam uma morfologia característica em forma de paralelepípedos quando cultivados em condições de baixo cálcio que suportam um estado proliferativo semelhante ao basal. Após o aumento do cálcio ou condições indutoras de diferenciação, eles passam por um programa bem definido de estratificação e diferenciação terminal, recapitulando aspectos-chave do desenvolvimento epidérmico.

Como as HEKs mantêm muitas características fisiológicas da epiderme nativa, elas são amplamente utilizadas em culturas monocamadas 2D, bem como em equivalentes cutâneos organotípicos 3D avançados que reproduzem a estratificação epidérmica e a formação de barreiras. Como células primárias, elas têm uma vida útil finita e capacidade proliferativa limitada, e seu fenótipo pode variar dependendo da fonte do doador e das condições de cultura. Portanto, o controlo cuidadoso do número de passagens e do estado de diferenciação é essencial para a reprodutibilidade experimental e para modelar a biologia normal da pele e os processos de doenças dermatológicas.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia