Menselijke epidermale keratinocyten

Humane epidermale keratinocyten (HEK's) zijn primaire epitheelcellen die worden geïsoleerd uit de epidermis van de menselijke huid, meestal verkregen uit de voorhuid van pasgeborenen of volwassen huidweefsel. Deze cellen vertegenwoordigen het overheersende celtype van de epidermis en zijn verantwoordelijk voor de vorming, instandhouding en regeneratie van het gelaagde plaveiselepitheel. In vitro vertonen HEK's een karakteristieke kassei-morfologie wanneer ze worden gekweekt onder omstandigheden met een laag calciumgehalte die een proliferatieve, basale toestand ondersteunen. Bij een verhoging van het calciumgehalte of onder omstandigheden die differentiatie induceren, ondergaan ze een welomschreven programma van stratificatie en terminale differentiatie, waarbij ze de belangrijkste aspecten van de ontwikkeling van de epidermis herhalen.

Omdat HEK's veel fysiologische kenmerken van de natuurlijke epidermis behouden, worden ze veel gebruikt in 2D-monolaagculturen en in geavanceerde 3D-organotypische huidequivalenten die de epidermale stratificatie en barrièrevorming reproduceren. Als primaire cellen hebben ze een eindige levensduur en een beperkt proliferatievermogen, en hun fenotype kan variëren afhankelijk van de donorbron en de kweekomstandigheden. Daarom is een zorgvuldige controle van het aantal passages en de differentiatietoestand essentieel voor de reproduceerbaarheid van experimenten en voor het modelleren van de normale huidbiologie en dermatologische ziekteprocessen.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring