ヒト表皮ケラチノサイト

ヒト表皮ケラチノサイト（HEK）は、ヒト皮膚の表皮から分離された一次上皮細胞であり、通常は新生児包皮または成人皮膚組織から得られる。これらの細胞は表皮の主要な細胞タイプを代表し、多層扁平上皮の形成、維持、再生を担っている。 in vitroでは、HEKは増殖性の基底様状態を維持する低カルシウム条件下で培養されると、特徴的な石畳様形態を示す。カルシウム濃度の上昇または分化誘導条件下では、明確な階層化と終末分化のプログラムを経ることで、表皮発達の主要な側面を再現する。

HEK細胞は天然表皮の多くの生理的特徴を維持するため、2次元単層培養だけでなく、表皮の層構造とバリア形成を再現する高度な3次元オルガノタイピック皮膚代替モデルにおいても広く利用されている。初代細胞として、寿命が有限で増殖能力に制限があり、ドナー源や培養条件によって表現型が変動する可能性がある。 したがって、実験の再現性や正常な皮膚生物学および皮膚疾患プロセスのモデル化には、継代回数と分化状態の慎重な管理が不可欠である。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。