Cheratinociti dell'epidermide umana

I cheratinociti epidermici umani (HEK) sono cellule epiteliali primarie isolate dall'epidermide della pelle umana, tipicamente ottenute dal prepuzio neonatale o dal tessuto cutaneo adulto. Queste cellule rappresentano il tipo cellulare predominante dell'epidermide e sono responsabili della formazione, del mantenimento e della rigenerazione dell'epitelio squamoso stratificato. In vitro, gli HEK mostrano una caratteristica morfologia a ciottoli quando vengono coltivati in condizioni di basso contenuto di calcio che favoriscono uno stato proliferativo di tipo basale. In seguito all'aumento del calcio o a condizioni che inducono la differenziazione, essi subiscono un programma ben definito di stratificazione e differenziazione terminale, riassumendo gli aspetti chiave dello sviluppo epidermico.

Poiché le HEK mantengono molte caratteristiche fisiologiche dell'epidermide nativa, sono ampiamente utilizzate nelle colture monostrato 2D e negli equivalenti cutanei organotipici 3D avanzati che riproducono la stratificazione epidermica e la formazione della barriera. Essendo cellule primarie, hanno una durata di vita limitata e una capacità proliferativa limitata, e il loro fenotipo può variare a seconda della fonte del donatore e delle condizioni di coltura. Pertanto, un attento controllo del numero di passaggi e dello stato di differenziazione è essenziale per la riproducibilità sperimentale e per la modellizzazione della biologia della pelle normale e dei processi delle malattie dermatologiche.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia