Keratinocyter från mänsklig epidermis

Humana epidermala keratinocyter (HEK) är primära epitelceller som isoleras från epidermis i mänsklig hud, vanligtvis från förhuden hos nyfödda eller vuxen hudvävnad. Dessa celler representerar den dominerande celltypen i epidermis och ansvarar för bildandet, underhållet och regenereringen av det stratifierade skivepitelet. In vitro uppvisar HEK en karakteristisk kullerstensmorfologi när de odlas under kalciumsnåla förhållanden som stödjer ett proliferativt, basal-liknande tillstånd. Vid kalciumökning eller differentieringsinducerande förhållanden genomgår de ett väldefinierat program av stratifiering och terminal differentiering, vilket återger viktiga aspekter av epidermal utveckling.

Eftersom HEK-celler behåller många fysiologiska egenskaper hos naturlig epidermis används de i stor utsträckning i 2D-monolagerodlingar samt i avancerade 3D-organotypiska hudekvivalenter som reproducerar epidermal stratifiering och barriärbildning. Som primära celler har de en begränsad livslängd och begränsad proliferativ kapacitet, och deras fenotyp kan variera beroende på donatorkälla och odlingsförhållanden. Därför är noggrann kontroll av passagenummer och differentieringsstatus avgörande för experimentell reproducerbarhet och för modellering av normal hudbiologi och dermatologiska sjukdomsprocesser.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring