Humane epidermale keratinocytter

Humane epidermale keratinocytter (HEK'er) er primære epitelceller isoleret fra epidermis i menneskelig hud, typisk opnået fra neonatal forhud eller voksent hudvæv. Disse celler repræsenterer den dominerende celletype i epidermis og er ansvarlige for dannelsen, vedligeholdelsen og regenereringen af det lagdelte pladecelleepitel. In vitro udviser HEK'er en karakteristisk brostenmorfologi, når de dyrkes under lavt calciumindhold, der understøtter en proliferativ, basal-lignende tilstand. Ved forhøjet calciumindhold eller differentieringsinducerende forhold gennemgår de et veldefineret program for lagdeling og terminal differentiering, der gentager nøgleaspekter af epidermal udvikling.

Da HEK'er bevarer mange fysiologiske egenskaber fra den naturlige epidermis, anvendes de i vid udstrækning i 2D-monolagskulturer samt i avancerede 3D-organotypiske hudækvivalenter, der reproducerer epidermal stratificering og barriereformation. Som primære celler har de en begrænset levetid og begrænset proliferativ kapacitet, og deres fænotype kan variere afhængigt af donorkilde og dyrkningsbetingelser. Derfor er omhyggelig kontrol af passageantal og differentieringsstatus afgørende for eksperimentel reproducerbarhed og for modellering af normal hudbiologi og dermatologiske sygdomsprocesser.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring