Žmogaus epidermio keratinocitai

Žmogaus epidermio keratinocitai (HEK) yra pirminės epitelio ląstelės, izoliuotos iš žmogaus odos epidermio, paprastai gaunamos iš naujagimio apyvarpės arba suaugusiojo odos audinio. Šios ląstelės yra vyraujantis epidermio ląstelių tipas ir yra atsakingos už sluoksniuoto plokščiojo epitelio formavimąsi, palaikymą ir regeneraciją. In vitro HEK, auginamos mažo kalcio kiekio sąlygomis, kurios skatina proliferaciją ir bazalinį būvį, pasižymi charakteristine akmenukų morfologija. Padidėjus kalcio kiekiui arba susidarius diferenciaciją skatinančioms sąlygoms, jos patiria aiškiai apibrėžtą sluoksniavimosi ir galutinės diferenciacijos procesą, atkartojantį pagrindinius epidermio vystymosi aspektus.

Kadangi HEK išlaiko daugelį natūralaus epidermio fiziologinių savybių, jos plačiai naudojamos 2D monosluoksnėse kultūrose, taip pat pažangiose 3D organotipinėse odos ekvivalentose, kurios atkuria epidermio sluoksniavimąsi ir barjero formavimąsi. Kaip pirminės ląstelės, jos turi ribotą gyvenimo trukmę ir ribotą proliferacijos gebą, o jų fenotipas gali skirtis priklausomai nuo donoro šaltinio ir kultivavimo sąlygų. Todėl kruopštus pasėlių skaičiaus ir diferenciacijos būklės kontrolė yra būtina eksperimentų atkuriamumui ir normalios odos biologijos bei dermatologinių ligų procesų modeliavimui.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime