Cilvēka epidermas keratinocīti

Cilvēka epidermas keratinocīti (HEK) ir primārās epitēlija šūnas, kas izdalītas no cilvēka ādas epidermas, parasti iegūtas no jaundzimušo priekšādas vai pieaugušo ādas audiem. Šīs šūnas ir epidermas dominējošais šūnu tips un atbild par slāņveida plakanšūnu epitēlija veidošanos, uzturēšanu un reģenerāciju. In vitro HEK, kultivējot zemā kalcija līmenī, kas veicina proliferatīvu, bazāla tipa stāvokli, uzrāda raksturīgu bruģakmens morfoloģiju. Kalcija līmeņa paaugstināšanās vai diferenciācijas indukcijas apstākļos tās iziet labi definētu stratifikācijas un terminālās diferenciācijas programmu, atkārtojot epidermas attīstības galvenos aspektus.

Tā kā HEK saglabā daudzas dabiskā epidermas fizioloģiskās īpašības, tās plaši izmanto 2D monoslāņa kultūrās, kā arī modernās 3D organotipiskās ādas ekvivalentos, kas reproducē epidermas stratifikāciju un barjeras veidošanos. Kā primārās šūnas tām ir ierobežots dzīves ilgums un ierobežota proliferatīvā spēja, un to fenotips var atšķirties atkarībā no donora avota un kultivēšanas apstākļiem. Tāpēc eksperimentu reproducējamībai un normālas ādas bioloģijas un dermatoloģisko slimību procesu modelēšanai ir būtiska rūpīga pasāžu skaita un diferenciācijas stāvokļa kontrole.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu