Human Epidermal Keratinocytes

Tế bào keratinocyte biểu bì người (HEKs) là các tế bào biểu mô nguyên phát được tách chiết từ biểu bì da người, thường được thu thập từ da quy đầu của trẻ sơ sinh hoặc mô da người trưởng thành. Các tế bào này đại diện cho loại tế bào chính của biểu bì và chịu trách nhiệm cho quá trình hình thành, duy trì và tái tạo của biểu mô vảy nhiều lớp. Trong điều kiện nuôi cấy in vitro, HEKs thể hiện hình thái đặc trưng dạng gạch lát khi được nuôi cấy trong điều kiện canxi thấp, hỗ trợ trạng thái tăng sinh và tương tự tế bào cơ bản. Khi nồng độ canxi tăng cao hoặc trong điều kiện kích thích biệt hóa, chúng trải qua một chương trình biệt hóa rõ ràng bao gồm phân tầng và biệt hóa cuối cùng, tái hiện các khía cạnh quan trọng của quá trình phát triển biểu bì.

Vì HEKs duy trì nhiều đặc điểm sinh lý của biểu bì tự nhiên, chúng được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy lớp đơn 2D cũng như trong các mô hình da tương đương 3D tiên tiến, tái tạo quá trình phân tầng biểu bì và hình thành hàng rào bảo vệ. Là tế bào nguyên phát, chúng có tuổi thọ hữu hạn và khả năng tăng sinh giới hạn, và biểu hiện kiểu hình của chúng có thể thay đổi tùy thuộc vào nguồn gốc người hiến và điều kiện nuôi cấy. Do đó, việc kiểm soát cẩn thận số lần truyền và trạng thái biệt hóa là điều cần thiết để đảm bảo tính tái hiện của thí nghiệm và để mô phỏng sinh lý da bình thường cũng như các quá trình bệnh lý da liễu.

37°C, 5%_CO₂, môi trường ẩm.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

Tại Cytion, chúng tôi cam kết về chất lượng và khả năng sống của các sản phẩm của mình. Chúng tôi đảm bảo rằng các tế bào của chúng tôi sẽ có khả năng sống tại thời điểm bắt đầu nuôi cấy trong 60 ngày kể từ khi vận chuyển từ cơ sở của chúng tôi. Chúng tôi cam kết rằng tất cả các vật liệu tuân thủ các thông số kỹ thuật được mô tả trong Giấy chứng nhận phân tích và/hoặc Tài liệu sản phẩm.

Để biết chi tiết đầy đủ, vui lòng tham khảo <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Tuyên bố Bảo hành.