Queratinocitos epidérmicos humanos

Los queratinocitos epidérmicos humanos (HEK) son células epiteliales primarias aisladas de la epidermis de la piel humana, que suelen obtenerse del prepucio neonatal o del tejido cutáneo adulto. Estas células representan el tipo celular predominante de la epidermis y son responsables de la formación, el mantenimiento y la regeneración del epitelio escamoso estratificado. In vitro, las HEK muestran una morfología característica en forma de adoquín cuando se cultivan en condiciones de bajo contenido en calcio que favorecen un estado proliferativo similar al basal. Tras un aumento del calcio o en condiciones que inducen la diferenciación, se someten a un programa bien definido de estratificación y diferenciación terminal, recapitulando aspectos clave del desarrollo epidérmico.

Dado que las HEK conservan muchas características fisiológicas de la epidermis nativa, se utilizan ampliamente en cultivos monocapa 2D, así como en equivalentes cutáneos organotípicos 3D avanzados que reproducen la estratificación epidérmica y la formación de barreras. Como células primarias, tienen una vida útil finita y una capacidad proliferativa limitada, y su fenotipo puede variar en función de la fuente del donante y las condiciones de cultivo. Por lo tanto, es esencial controlar cuidadosamente el número de pases y el estado de diferenciación para garantizar la reproducibilidad experimental y modelar la biología normal de la piel y los procesos de las enfermedades dermatológicas.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía