Humane epidermale keratinocytter

Humane epidermale keratinocytter (HEK) er primære epitelceller isolert fra epidermis i menneskelig hud, vanligvis hentet fra forhuden til nyfødte eller hudvev fra voksne. Disse cellene representerer den dominerende celletypen i epidermis og er ansvarlige for dannelsen, vedlikeholdet og regenereringen av det lagdelte plateepitelet. In vitro viser HEK en karakteristisk brosteinsmorfologi når de dyrkes under lavkalsiumforhold som støtter en proliferativ, basal-lignende tilstand. Ved kalsiumøkning eller differensieringsinduserende forhold gjennomgår de et veldefinert program for stratifisering og terminal differensiering, som gjenspeiler viktige aspekter av epidermal utvikling.

Fordi HEK-celler opprettholder mange fysiologiske egenskaper fra naturlig epidermis, brukes de mye i 2D-monolagskulturer samt i avanserte 3D-organotypiske hudekvivalenter som reproduserer epidermal stratifisering og barriereformasjon. Som primære celler har de en begrenset levetid og begrenset proliferativ kapasitet, og deres fenotype kan variere avhengig av donorkilde og dyrkningsforhold. Derfor er nøye kontroll av passasjeantall og differensieringsstatus avgjørende for eksperimentell reproduserbarhet og for modellering av normal hudbiologi og dermatologiske sykdomsprosesser.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring