Emberi epidermális keratinociták

Az emberi epidermális keratinociták (HEK-ek) elsődleges epiteliális sejtek, amelyeket az emberi bőr epidermiszéből izolálnak, általában újszülött előbőrből vagy felnőtt bőrszövetből nyerik. Ezek a sejtek az epidermisz domináns sejttípusát képviselik, és felelősek a réteges laphám kialakulásáért, fenntartásáért és regenerációjáért. In vitro körülmények között a HEK-ek jellegzetes macskaköves morfológiát mutatnak, ha alacsony kalciumtartalmú körülmények között tenyésztik őket, amelyek elősegítik a proliferatív, bazális állapotot. Kalciumszint emelkedése vagy differenciálódást indukáló körülmények esetén jól meghatározott rétegződési és terminális differenciálódási programon mennek keresztül, amely az epidermisz fejlődésének legfontosabb aspektusait foglalja össze.

Mivel a HEK-ek az eredeti epidermisz számos fiziológiai jellemzőjét megőrzik, széles körben használják őket 2D monorétegű tenyészetekben, valamint fejlett 3D organotípusú bőrpótlékokban, amelyek reprodukálják az epidermisz rétegződését és a barrier kialakulását. Elsődleges sejtek lévén véges élettartammal és korlátozott proliferatív képességgel rendelkeznek, és fenotípusuk a donor forrásától és a tenyésztési körülményektől függően változhat. Ezért a passzázsszám és a differenciálódási állapot gondos ellenőrzése elengedhetetlen a kísérletek reprodukálhatósága, valamint a normális bőrbiológia és a dermatológiai betegségek folyamatainak modellezése szempontjából.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban