Ihmisen ihon keratinosyytit

Ihmisen epidermaaliset keratinosyytit (HEK) ovat primaarisia epiteelisoluja, jotka on eristetty ihmisen ihon epidermiksestä, tyypillisesti vastasyntyneen esinahan tai aikuisen ihokudoksesta. Nämä solut edustavat epidermiksen pääasiallista solutyyppiä ja ovat vastuussa kerrostuneen levyepiteelin muodostumisesta, ylläpidosta ja uudistumisesta. In vitro HEK-solut näyttävät tyypillistä mukulakivimorfologiaa, kun niitä viljellään vähäkaltaisissa olosuhteissa, jotka tukevat proliferatiivista, basaalista tilaa. Kalsiumin nousun tai erilaistumista indusoivien olosuhteiden myötä ne käyvät läpi tarkasti määritellyn kerrostumisen ja terminaalisen erilaistumisen prosessin, joka toistuu epidermaalisen kehityksen keskeisissä vaiheissa.

Koska HEK-solut säilyttävät monia natiivin epidermiksen fysiologisia ominaisuuksia, niitä käytetään laajalti 2D-monokerroskulttuureissa sekä edistyneissä 3D-organotyyppisissä ihon ekvivalenteissa, jotka jäljittelevät epidermiksen kerrostumista ja esteen muodostumista. Primaarisina soluina niiden elinikä on rajallinen ja proliferaatiokapasiteetti rajoitettu, ja niiden fenotyyppi voi vaihdella luovuttajalähteestä ja viljelyolosuhteista riippuen. Siksi solujen siirtokertojen ja erilaistumistilan huolellinen valvonta on välttämätöntä kokeiden toistettavuuden ja normaalin ihon biologian ja ihosairauksien prosessien mallintamisen kannalta.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa