Ανθρώπινα επιδερμικά κερατινοκύτταρα

Τα ανθρώπινα επιδερμικά κερατινοκύτταρα (HEK) είναι πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα που απομονώνονται από την επιδερμίδα του ανθρώπινου δέρματος, τα οποία συνήθως λαμβάνονται από το δέρμα του νεογέννητου ή από τον ιστό του δέρματος ενηλίκων. Αυτά τα κύτταρα αντιπροσωπεύουν τον κυρίαρχο τύπο κυττάρων της επιδερμίδας και είναι υπεύθυνα για το σχηματισμό, τη διατήρηση και την αναγέννηση του στρωματοποιημένου πλακώδους επιθηλίου. In vitro, τα HEK εμφανίζουν μια χαρακτηριστική μορφολογία «κυβόλιθου» όταν καλλιεργούνται σε συνθήκες χαμηλού ασβεστίου που υποστηρίζουν μια πολλαπλασιαστική, βασική κατάσταση. Μετά την αύξηση του ασβεστίου ή σε συνθήκες που προκαλούν διαφοροποίηση, υποβάλλονται σε ένα καλά καθορισμένο πρόγραμμα στρωματοποίησης και τελικής διαφοροποίησης, ανακεφαλαιώνοντας βασικά στοιχεία της ανάπτυξης της επιδερμίδας.

Επειδή τα HEK διατηρούν πολλά φυσιολογικά χαρακτηριστικά της φυσικής επιδερμίδας, χρησιμοποιούνται ευρέως σε μονοστρωματικές καλλιέργειες 2D, καθώς και σε προηγμένα οργανωτικά ισοδύναμα δέρματος 3D που αναπαράγουν τη στρωματοποίηση της επιδερμίδας και το σχηματισμό φραγμού. Ως πρωτογενή κύτταρα, έχουν περιορισμένη διάρκεια ζωής και περιορισμένη ικανότητα πολλαπλασιασμού, και ο φαινότυπός τους μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με την πηγή του δότη και τις συνθήκες καλλιέργειας. Επομένως, ο προσεκτικός έλεγχος του αριθμού των περασμάτων και της κατάστασης διαφοροποίησης είναι απαραίτητος για την αναπαραγωγιμότητα των πειραμάτων και για τη μοντελοποίηση της φυσιολογικής βιολογίας του δέρματος και των δερματολογικών παθήσεων.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης