Ľudské epidermálne keratinocyty

Ľudské epidermálne keratinocyty (HEK) sú primárne epitelové bunky izolované z epidermis ľudskej kože, zvyčajne získané z novorodeneckej predkožky alebo tkaniva kože dospelých. Tieto bunky predstavujú prevládajúci typ buniek epidermis a sú zodpovedné za formovanie, udržovanie a regeneráciu vrstevnatého dlaždicového epitelu. In vitro vykazujú HEK charakteristickú morfológiu dlažobných kameňov, keď sú kultivované v podmienkach s nízkym obsahom vápnika, ktoré podporujú proliferatívny, bazálny stav. Pri zvýšení hladiny vápnika alebo v podmienkach indukujúcich diferenciáciu prechádzajú jasne definovaným programom stratifikácie a terminálnej diferenciácie, čím zhrňujú kľúčové aspekty vývoja epidermis.

Keďže HEK zachovávajú mnoho fyziologických charakteristík pôvodnej epidermis, sú široko používané v 2D monovrstvových kultúrach, ako aj v pokročilých 3D organotypických ekvivalentoch kože, ktoré reprodukujú stratifikáciu epidermis a tvorbu bariéry. Ako primárne bunky majú obmedzenú životnosť a obmedzenú proliferatívnu kapacitu a ich fenotyp sa môže líšiť v závislosti od zdroja darcu a kultivačných podmienok. Preto je starostlivá kontrola počtu pasáží a stavu diferenciácie nevyhnutná pre reprodukovateľnosť experimentov a modelovanie normálnej biológie kože a procesov dermatologických ochorení.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of keratinocyte growth medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of keratinocyte growth medium. Check cell number and viability.

4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

8. Recommended seeding density: more than 6,000 cells/cm².

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke