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Sp2/0-Ag14
Tessuto
Sangue
Malattia
Ibridoma di cellule B
Sinonimi
SP2/0-Ag14, SP2/0-AG14, SP2/0-ag14, Sp2/O-Ag14, SP2/O-Ag14, Sp2/0-Ag-14, SP2-0-Ag14, SP2/0 Ag-14, SP-2/0-AG14, Sp 2/0-Ag 14, Sp2/0, SP2/0, Sp2/O, SP2/O, SP-2, SP2, GM03569, GM3569, GM03569B, GM3569B, GM03569D

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Sp2/0-Ag14

Cell line · Codice prodotto 400481

La linea cellulare Sp2/0-Ag14, comunemente denominata Sp2/0, è una linea cellulare di mieloma murino ampiamente utilizzata per la produzione di anticorpi monoclonali. Origini...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare Sp2/0-Ag14, comunemente chiamata Sp2/0, è una linea cellulare di mieloma murino ampiamente utilizzata per la produzione di anticorpi monoclonali. Originata dal ceppo di topi BALB/c, questa linea cellulare è stata sviluppata fondendo cellule della milza di topi immunizzati con cellule di mieloma che mancano dell'enzima ipoxantina-guanina fosforibosiltransferasi (HGPRT). Questa carenza rende le cellule Sp2/0 incapaci di sopravvivere nel terreno HAT (ipoxantina, aminopterina, timidina), una caratteristica cruciale per la selezione degli ibridomi quando vengono fusi con cellule della milza di topi immunizzati, poiché solo le cellule dell'ibridoma possono proliferare in questo terreno selettivo.

La linea cellulare Sp2/0-Ag14 si caratterizza per la sua stabilità e robustezza in coltura cellulare, che la rendono un ospite preferito per la produzione di ibridomi. L'assenza di produzione di immunoglobuline in queste cellule è una caratteristica fondamentale perché impedisce la secrezione di immunoglobuline endogene che potrebbero interferire con l'anticorpo monoclonale prodotto dagli ibridomi. Questa linea cellulare è stata ampiamente utilizzata nella ricerca scientifica e nelle applicazioni industriali per generare anticorpi monoclonali contro un'ampia gamma di antigeni. Gli anticorpi prodotti sono utilizzati nella ricerca, nella diagnostica e nelle applicazioni terapeutiche, evidenziando la significativa utilità della linea cellulare Sp2/0 nelle industrie biotecnologiche e farmaceutiche.

Tessuto
Sangue
Malattia
Ibridoma di cellule B
Sinonimi
  • SP2/0-Ag14
  • SP2/0-AG14
  • SP2/0-ag14
  • Sp2/O-Ag14
  • SP2/O-Ag14
  • Sp2/0-Ag-14
  • SP2-0-Ag14
  • SP2/0 Ag-14
  • SP-2/0-AG14
  • Sp 2/0-Ag 14
  • Sp2/0
  • SP2/0
  • Sp2/O
  • SP2/O
  • SP-2
  • SP2
  • GM03569
  • GM3569
  • GM03569B
  • GM3569B
  • GM03569D

02Classificazione

Organismo
Mouse
Proprietà di crescita
Aderente e in sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Celle rotonde

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Sp2/0-Ag14 (numero di catalogo Cytion 400481)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_2199

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
H-2d
Virus
Testato e trovato negativo per il virus dell'ectromelia (vaiolo dei topi).

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Subcoltura
Raccogliere il terreno con le cellule galleggianti in una provetta da microcentrifuga. Sciacquare le cellule aderenti con PBS senza calcio e magnesio (3-5 ml di PBS per T25, 5-10ml per le fiasche di coltura T75). Aggiungere Accutase (1-2ml per T25, 2,5ml per fiasche di coltura T75), coprendo completamente il foglio cellulare. Incubare a 37 gradi Celsius per 10 minuti. Unire le cellule galleggianti e quelle staccate in una provetta, centrifugare a 300xg per 3 minuti. Risospendere accuratamente le cellule in terreno fresco e distribuirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Mantenere la densità cellulare tra 5 x 104 e 5 x 106 cellule vitali/ml.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
BALB/c