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K7M2 wt-Luc
Tessuto
Ascite
Malattia
Osteosarcoma di topo
Sito metastatico
Polmone
Sinonimi
K7M2-WT, K7M2

Documenti

K7M2 wt-Luc

Cell line · Codice prodotto 305684

K7M2 wt-Luc is a bioluminescent derivative of the murine K7M2 osteosarcoma cell line, engineered to stably express a firefly luciferase reporter gene. The...

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01Informazioni generali

Descrizione

K7M2 wt-Luc è un derivato bioluminescente della linea cellulare murina K7M2 di osteosarcoma, ingegnerizzata per esprimere in modo stabile un gene reporter della luciferasi di lucciola. La linea cellulare parentale K7M2 è stata ottenuta dall’ascite di un osteosarcoma spontaneo in un topo BALB/c ed è caratterizzata da morfologia osteoblastica e da un elevato potenziale metastatico, in particolare verso i polmoni. K7M2 è uno dei pochi modelli di osteosarcoma singeneico disponibili nel ceppo BALB/c, il che lo rende uno strumento prezioso per lo studio della biologia dell’osteosarcoma, delle interazioni tumore-sistema immunitario e per la valutazione delle strategie di immunoterapia in un ospite immunocompetente.

L’integrazione stabile della luciferasi in K7M2 wt-Luc consente un’imaging a bioluminescenza (BLI) sensibile e non invasivo della crescita del tumore primario e della diffusione metastatica polmonare nei topi BALB/c singeneici. A seguito della somministrazione del substrato luciferina, il segnale emesso è correlato al numero di cellule tumorali vitali, consentendo il monitoraggio longitudinale dell’attecchimento del tumore, della colonizzazione metastatica e della risposta terapeutica senza ricorrere a procedure invasive in ciascun momento di valutazione. Ciò rende K7M2 wt-Luc particolarmente adatto agli studi preclinici volti a valutare agenti antitumorali e antimetastatici, inibitori dei checkpoint e strategie di trattamento combinato nell’osteosarcoma.

K7M2 wt-Luc conserva le proprietà biologiche e immunologiche della linea parentale K7M2, compresa l’espressione del componente del complemento C3 e del recettore Fc gamma I (FcgRI), caratteristiche che possono influenzare le interazioni con il sistema immunitario innato. Il reporter a base di luciferasi migliora notevolmente la flessibilità sperimentale e la sensibilità per il monitoraggio in tempo reale della progressione tumorale. I ricercatori dovrebbero verificare l’attività della luciferasi, la cinetica di crescita e il comportamento metastatico nelle loro specifiche condizioni sperimentali prima di un impiego in vivo su larga scala.

Tessuto
Ascite
Malattia
Osteosarcoma di topo
Sito metastatico
Polmone
Applicazioni
Ricerca sull'osteosarcoma; modello tumorale singeneico BALB/c; imaging delle metastasi polmonari tramite bioluminescenza; valutazione di farmaci antitumorali e antimetastatici; test sugli inibitori dei checkpoint; studi sull'interazione con il sistema immunitario innato (C3, FcgRI); immunoterapia per il cancro osseo pediatrico
Sinonimi
  • K7M2-WT
  • K7M2

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated firefly luciferase reporter cassette (Luc2, codon-optimized) introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Osteoblasto
Tumorigenico
Sì

04Identificatori

Riferimento bibliografico
K7M2 wt-Luc (codice catalogo Cytion 305684)
Codice fiscale NCBI
10090

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
Complemento(C3), espresso, recettore Fc, IgG, alta affinità I(Fcgr1), espresso
Espressione dell'antigene
Luc2 (lucciola, ottimizzata a livello di codoni)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
da 1 a 3
Densità di semina
1-3*10^4/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo + 10% DMSO per ottenere un'adeguata vitalità post-scongelamento.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
BALB/c
Età dei donatori
895 giorni