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KYSE-30
Tessuto
Epitelio squamoso esofageo
Malattia
Carcinoma a cellule squamose dell'esofago
Sinonimi
Kyse-30, KYSE 30, KYSE30, Kyse30, KYSE0030

Documenti

KYSE-30

Cell line · Codice prodotto 305094

KYSE-30 is a well-differentiated human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) cell line derived from a primary tumor in an adult patient. As part of th...

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01Informazioni generali

Descrizione

KYSE-30 è una linea cellulare ben differenziata di carcinoma esofageo umano a cellule squamose (ESCC) derivata da un tumore primario di un paziente adulto. Come parte della serie KYSE, questa linea cellulare è stata creata per studiare le caratteristiche molecolari e cellulari del cancro esofageo. Le cellule KYSE-30 si distinguono per la loro rapida proliferazione, con un tempo di raddoppio di 20,8 ore, che le rende un modello robusto per la ricerca oncologica in vitro. Queste cellule crescono prevalentemente come monostrati aderenti, mostrando una caratteristica forma poligonale e un aspetto uniforme al microscopio a contrasto di fase. Il loro modello di crescita è tipico delle cellule tumorali di derivazione epiteliale, formando colonie strettamente impacchettate con la tendenza ad ammassarsi in modo disorganizzato, riflettendo la natura invasiva del tumore da cui sono derivate.

Dal punto di vista genetico, KYSE-30 è significativa per le sue alterazioni in geni soppressori tumorali chiave. La linea cellulare presenta una configurazione wild-type per i geni p16 (INK4a) e p15 (INK4b), ma è portatrice di una notevole mutazione puntiforme nel gene p16 che determina un codone di stop prematuro, portando a una proteina tronca e non funzionale. Questa mutazione contribuisce probabilmente alla perdita del controllo del ciclo cellulare, favorendo la proliferazione incontrollata caratteristica delle cellule tumorali. Il mantenimento del gene p15 wild-type, tuttavia, suggerisce che le alterazioni del gene p16 svolgono un ruolo più critico nell'oncogenesi di KYSE-30, il che può essere rilevante negli studi incentrati sui ruoli differenziali di questi geni nel cancro.

KYSE-30 è tumorigenico, come dimostrato dalla sua capacità di formare tumori quando viene iniettato in topi nudi atimici, il che lo rende un modello eccellente per gli studi in vivo dell'ESCC. L'esame istologico dei tumori formati dalle cellule KYSE-30 mostra caratteristiche simili al carcinoma squamoso originale, fornendo una rappresentazione fedele della malattia. Questa linea cellulare è preziosa per la ricerca sui meccanismi della tumorigenesi, sui cambiamenti genetici ed epigenetici che guidano il cancro esofageo e sullo sviluppo di terapie mirate, sebbene non sia adatta per applicazioni terapeutiche o in vivo.

Tessuto
Epitelio squamoso esofageo
Malattia
Carcinoma a cellule squamose dell'esofago
Sinonimi
  • Kyse-30
  • KYSE 30
  • KYSE30
  • Kyse30
  • KYSE0030

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio, con lungo pseudopodo
Tempo di raddoppio
da 20 a 30 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
KYSE-30 (numero di catalogo Cytion 305094)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1351

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Miscelare Ham's F12 e RPMI 1640 in un rapporto 50:50 (articolo Cytion numero 820600a e 820702a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
64 anni
Etnia
Asiatico