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KYSE520
Tessuto
Esofago
Malattia
Carcinoma a cellule squamose
Sinonimi
KYSE 520, KYSE-520, Kyse520, KYSE0520

Documenti

KYSE520

Cell line · Codice prodotto 305449

The KYSE520 cell line is a human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) model derived from a primary tumor. It is moderately differentiated and has bee...

€550.00IVA e spese di spedizione escluse

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare KYSE520 è un modello di carcinoma esofageo a cellule squamose (ESCC) umano derivato da un tumore primario. È moderatamente differenziata ed è stata fondamentale per studiare la plasticità epitelio-mesenchimale (EMP) nel cancro esofageo. Le cellule KYSE520 presentano un'eterogeneità che consiste in sottopopolazioni di tipo epiteliale (CD44v+) e mesenchimale (CD44v-). Queste due popolazioni sono in grado di interconvertirsi, riflettendo un processo dinamico di EMP. Questa proprietà rende KYSE520 un modello eccellente per studiare le caratteristiche delle cellule staminali del cancro e i meccanismi di chemioresistenza nell'ESCC.

Dal punto di vista genetico, le cellule KYSE520 presentano una notevole regolazione epigenetica. La regione del promotore del gene JAM3, un soppressore tumorale, non è metilata in queste cellule, consentendone l'espressione. JAM3 svolge un ruolo nella regolazione della proliferazione, della migrazione e dell'invasione cellulare attraverso la segnalazione di Wnt/β-catenina. Il mantenimento dell'espressione di JAM3 in KYSE520 è stato collegato alla soppressione di fenotipi tumorali aggressivi.

Nella ricerca terapeutica, le cellule KYSE520 sono state utilizzate per esplorare il ruolo del recettore del fattore di crescita dei fibroblasti simile a 1 (FGFRL1). Gli studi hanno dimostrato che le cellule KYSE520 con deficit di FGFRL1 presentano una crescita e una motilità tumorale ridotte, oltre a una diminuzione dell'espressione della metalloproteinasi-1 della matrice (MMP-1) e della proteina 1 legante il fattore di crescita dei fibroblasti (FGFBP1). Questi risultati sottolineano l'importanza di FGFRL1 nella tumorigenesi e suggeriscono potenziali bersagli terapeutici. Inoltre, le dinamiche EMP e le vie molecolari associate nelle cellule KYSE520 forniscono approfondimenti sulla progressione e sui meccanismi di resistenza dell'ESCC, contribuendo allo sviluppo di trattamenti mirati.

Tessuto
Esofago
Malattia
Carcinoma a cellule squamose
Sinonimi
  • KYSE 520
  • KYSE-520
  • Kyse520
  • KYSE0520

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
KYSE520 (numero di catalogo Cytion 305449)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1355

05Espressione e suscettibilità

Oncogeni
TP53, MYC
Profilo mutazionale
Mutazione: TP53, c.376-2A>T, mutazione dell'accettore di splicing

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Ham's F12, w: 1,0 mM di glutammina stabile, w: 1,0 mM di piruvato di sodio, w: 1,1 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820600a) + RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a); miscela 1:1
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 2% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
0,6 - 1,2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
2 volte a settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
58 anni
Etnia
Giapponese