Pāriet uz saturu
LMH
Audums
Aknas
Slimība
Hepatocelulārā karcinoma
Sinonīmi
Leghorn Male Hepatoma cell line

Dokumenti

LMH

Cell line · Preces numurs 601411

LMH cells, derived from a Leghorn male hepatoma, are a versatile cell line widely used in biological research. Tomoyuki Kitagawa established them in 1981 ...

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

LMH šūnas, kas iegūtas no Leghorn vīriešu hepatomas, ir universāla šūnu līnija, ko plaši izmanto bioloģiskajos pētījumos. Tomoyuki Kitagawa tās izveidoja 1981. gadā Tokijas (Japāna) Vēža institūtā. Šīm šūnām ir epitēlija fenotips, un tās ir īpaši noderīgas mājputnu kuņģa un zarnu trakta saimnieka un patogēna mijiedarbības izpētei.

LMH šūnas ir adherentas un tām ir dendrītiem līdzīga morfoloģija. Tās ekspresē glikozes-6-fosfatāzi un vāju kanālikulārās ATPāzes aktivitāti. Šīm šūnām ir triploīdais kariotips un sešas marķieru hromosomas, un tām piemīt atšķirīgas ģenētiskās īpašības.
Ir pierādīts, ka LMH šūnas efektīvi atbalsta kaķu hepatīta B vīrusa (DHBV) DNS sintēzi, kad tās ir transficētas ar vīrusa konstrukcijām. Tas padara tās par nenovērtējamu instrumentu virusoloģijas pētījumos, jo īpaši saistībā ar mājputnu vīrusu infekcijām.
LMH šūnu iegūšanā izmantoja Leghorn cāļu aknu audzēju audzēju mezglu veidošanos, ilgstoši apstrādājot ar dietilnitrozamīnu. Šīs šūnas tika arī ķīmiski pārveidotas, kas ļāva tās imortalizēt un nepārtraukti pavairot kultūrā.

Kas attiecas uz audzēja aktivitāti, LMH šūnām ir spēja veidot audzējus atimiskās nude pelēs. Šī īpašība padara tās par svarīgu modeli hepatocelulārās karcinomas izpētei. LMH šūnas ekspresē estrogēnu receptoru, un tās var inducēt aknām specifiskā apolipoproteīna II (apoII) gēna ekspresiju. Tas norāda uz to iesaistīšanos estrogēnu signalizācijas ceļos un lipīdu metabolismā. Lai kultivētu LMH šūnas, audu kultūru trauki ir iepriekš jāpārklāj ar kolagēnu. Tas nodrošina pareizu šūnu saķeri un augšanu.

Audums
Aknas
Slimība
Hepatocelulārā karcinoma
Pieteikumi
Šūnu līnija ir noderīga transfekcijas pētījumiem.
Sinonīmi
  • Leghorn Male Hepatoma cell line

02Klasifikācija

Organisms
Vistas gaļa
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveida, dendrītveida.
Tumorogēns
LMH šūnas veido audzējus atimiskām pelēm.
Kariotips
Triploīds, modālais skaits = 116, sešas marķieru hromosomas

04Identifikatori

Atsauce
LMH (Cytion kataloga numurs 601411)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9031
Cellosaurus
CVCL_2580

05Pazīmes un uzņēmība

Ekspresētie receptori
Estrogēns (zema līmeņa ekspresija).
Produkti
Glikoze-6-fosfatāze, kanālikulārās ATPāzes aktivitāte (vāja)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
LMH šūnas labāk pievienojas audu kultūru traukiem, kas iepriekš pārklāti ar kolagēnu. Noņemt barotni un izskalot pielipušās šūnas, izmantojot PBS bez kalcija un magnija (3-5 ml PBS T25, 5-10 ml T75 šūnu kultūru kolbām). Pievienojiet Accutase (1-2 ml T25 kolbām, 2,5 ml T75 šūnu kultūru kolbām), šūnu slānis ir pilnībā jānosedz. Inkubēt istabas temperatūrā 8-10 minūtes. Uzmanīgi resuspendēt šūnas ar barotni (10 ml), centrifugēt 3 minūtes ar 300 g, resuspendēt šūnas svaigā barotnē un iepildīt jaunās kolbās, kurās ir svaiga barotne
Sēšanas blīvums
1 līdz 3 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 2 dienām
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
Leghorn
Donora vecums
16 mēneši