Prejsť na obsah
LMH
Tkanivo
Pečeň
Choroba
Hepatocelulárny karcinóm
Synonymá
Leghorn Male Hepatoma cell line

Dokumenty

LMH

Cell line · Číslo výrobku 601411

LMH cells, derived from a Leghorn male hepatoma, are a versatile cell line widely used in biological research. Tomoyuki Kitagawa established them in 1981 ...

€550.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

Bunky LMH, odvodené od samčieho hepatómu Leghorn, sú univerzálnou bunkovou líniou, ktorá sa široko používa v biologickom výskume. Tomoyuki Kitagawa ich založil v roku 1981 na Inštitúte pre rakovinu v Tokiu v Japonsku. Tieto bunky majú epitelový fenotyp a sú obzvlášť užitočné na štúdium interakcií medzi hostiteľom a patogénom v gastrointestinálnom trakte hydiny.

Bunky LMH sú adherentné a vykazujú morfológiu podobnú dendritom. Vyjadrujú glukózo-6-fosfatázu a slabú aktivitu kanálovej ATPázy. Tieto bunky s triploidným karyotypom a šiestimi markerovými chromozómami vykazujú odlišné genetické charakteristiky.
Ukázalo sa, že bunky LMH účinne podporujú syntézu DNA vírusu kačacej hepatitídy B (DHBV) pri transfekcii vírusovými konštruktmi. To z nich robí neoceniteľný nástroj pre virologický výskum, najmä v súvislosti s vírusovými infekciami hydiny.
Odvodenie buniek LMH zahŕňalo indukciu nádorových uzlíkov v pečeni kurčiat plemena Leghorn prostredníctvom dlhodobého ošetrenia dietylnitrozamínom. Tieto bunky boli tiež chemicky transformované, čo umožnilo ich imortalizáciu a kontinuálne rozmnožovanie v kultúre.

Pokiaľ ide o nádorovú aktivitu, bunky LMH majú schopnosť vytvárať nádory v atýmových nahých myšiach. Táto vlastnosť z nich robí dôležitý model na štúdium hepatocelulárneho karcinómu. Bunky LMH exprimujú estrogénový receptor a môžu byť indukované na expresiu pečeňovo špecifického génu apolipoproteínu II (apoII). To naznačuje ich zapojenie do estrogénových signálnych dráh a metabolizmu lipidov. Na kultiváciu buniek LMH je potrebné vopred pokryť nádoby na kultiváciu tkanív kolagénom. Tým sa zabezpečí správna adhézia a rast buniek.

Tkanivo
Pečeň
Choroba
Hepatocelulárny karcinóm
Aplikácie
Bunková línia je užitočná na štúdie transfekcie.
Synonymá
  • Leghorn Male Hepatoma cell line

02Klasifikácia

Organizmus
Kuracie mäso
Sex
Muž
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelové, dendritické.
Tumorigenický
Bunky LMH tvoria nádory u atýmových myší.
Karyotyp
Triploid, modálne číslo = 116, šesť markerových chromozómov

04Identifikátory

Citácia
LMH (katalógové číslo Cytion 601411)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9031
Cellosaurus
CVCL_2580

05Prejav a náchylnosť

Exprimované receptory
Estrogén (nízka expresia).
Produkty
Glukóza-6-fosfatáza, kanálová ATPázová aktivita (slabá)

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamín, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion číslo článku 820100a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10% FBS a 1% NEAA
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Bunky LMH sa lepšie prichytávajú na cievy tkanivových kultúr, ktoré boli vopred potiahnuté kolagénom. Odstráňte médium a opláchnite prichytené bunky pomocou PBS bez vápnika a horčíka (3 - 5 ml PBS pre banky na kultiváciu buniek T25, 5 - 10 ml pre banky na kultiváciu buniek T75). Pridajte Accutase (1 - 2 ml na T25, 2,5 ml na banku s bunkovou kultúrou T75), bunkový list musí byť úplne pokrytý. Inkubujte pri teplote okolia 8-10 minút. Opatrne resuspendujte bunky s médiom (10 ml), odstreďujte 3 minúty pri 300 g, resuspendujte bunky v čerstvom médiu a rozmiestnite do nových fliaš, ktoré obsahujú čerstvé médium
Hustota výsevu
1 až 3 x 104 buniek/cm2
Obnova kvapaliny
Každé 2 dni
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Plemeno / poddruh
Leghorn
Vek darcu
16 mesiacov