LMH

As células LMH, derivadas de um hepatoma de um macho da raça Leghorn, são uma linhagem celular versátil amplamente utilizada em pesquisas biológicas. Tomoyuki Kitagawa as isolou em 1981 no Instituto do Câncer de Tóquio, no Japão. Essas células apresentam um fenótipo epitelial e são particularmente úteis para o estudo das interações hospedeiro-patógeno no trato gastrointestinal de aves.

As células LMH são aderentes e apresentam morfologia semelhante à das células dendríticas. Elas expressam glicose-6-fosfatase e apresentam fraca atividade de ATPase canalicular. Com um cariótipo triploide e seis cromossomos marcadores, essas células exibem características genéticas distintas.
Notavelmente, demonstrou-se que as células LMH suportam de forma eficiente a síntese de DNA do vírus da hepatite B do pato (DHBV) quando transfectadas com construções virais. Isso as torna uma ferramenta inestimável para a pesquisa virológica, particularmente no contexto de infecções virais relacionadas às aves.
A obtenção das células LMH envolveu a indução de nódulos tumorais no fígado de galinhas da raça Leghorn por meio de tratamento de longo prazo com dietilnitrosamina. Essas células também foram quimicamente transformadas, permitindo sua imortalização e propagação contínua em cultura.

Em termos de tumorigenicidade, as células LMH têm a capacidade de formar tumores em camundongos nude atímicos. Essa característica as torna um importante modelo para o estudo do carcinoma hepatocelular. As células LMH expressam o receptor de estrogênio e podem ser induzidas a expressar o gene da apolipoproteína II (apoII), específico do fígado. Isso indica seu envolvimento nas vias de sinalização do estrogênio e no metabolismo lipídico. Para cultivar células LMH, é necessário pré-revestir os recipientes de cultura de tecidos com colágeno. Isso garante a adesão e o crescimento adequados das células.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.