Ga naar de inhoud
TT
Weefsel
Schildklier, merg
Ziekte
Erfelijk schildklier medullair carcinoom, multipele endocriene neoplasie type 2
Plaats van uitzaaiingen
Niet van toepassing (primair erfelijk medullair schildkliercarcinoom; geen gedocumenteerde metastasen op afstand)
Synoniemen
MTC-TT

Documenten

TT

Cell line · Productnummer 305027

TT cells continuously produce high levels of calcitonin and CEA.Immunoreactive calcitonin was found to be produced in cell culture at levels of 3900 pg/milli...

€430.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
1

01Algemene informatie

Beschrijving
TT cellen produceren continu hoge niveaus van calcitonine en CEA. Immunoreactief calcitonine bleek in de celkweek te worden geproduceerd bij niveaus van 3900 pg/miljoen cellen en 7700 pg/miljoen cellen, respectievelijk 24 en 72 uur na een mediumwissel. CEA bleek te accumuleren tot meer dan 27 ng/miljoen cellen over een periode van 72 uur. Chromosomale analyse van de cellijn en tumoren geïnduceerd in naakte muizen onthullen een aneuploïd menselijk karyotype met verschillende merkerchromosomen.De eerste karakteriseringsstudies van de TT cellijn werden uitgevoerd met behulp van vroege passage TT cellen gekweekt in RPMI 1640 medium aangevuld met 15% foetaal runderserum en 1mM L-glutamine.Het is niet bekend of de neuropeptiden die door deze cellijn geproduceerd worden wanneer deze gekweekt wordt in RPMI 1640 medium ook geproduceerd worden door de cellen wanneer deze gekweekt worden in Ham's F-12K medium. Chromosomale analyse van de cellijn en tumoren geïnduceerd in naakte muizen onthullen een aneuploïd menselijk karyotype met verschillende markerchromosomen.
Weefsel
Schildklier, merg
Ziekte
Erfelijk schildklier medullair carcinoom, multipele endocriene neoplasie type 2
Plaats van uitzaaiingen
Niet van toepassing (primair erfelijk medullair schildkliercarcinoom; geen gedocumenteerde metastasen op afstand)
Toepassingen
Onderzoek naar medullair schildkliercarcinoom; biologie van neuro-endocriene tumoren; onderzoek naar de afscheiding van calcitonine; biologie van MEN2; analyse van de RET-proto-oncogen-route; gevoeligheid voor geneesmiddelen (cabozantinib, vandetanib, everolimus); onderzoek naar neuro-endocriene biomarkers; ontwikkeling van CEA-tests
Synoniemen
  • MTC-TT

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
Zonder genetisch gemodificeerde organismen
Details over de GGO-status
No genetic modification; wildtype hereditary medullary thyroid carcinoma cell line
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Celtype
Neuro-endocriene cellen (C-cellen / parafolliculaire cellen)
Tumorverwekkend
Ja
Verdubbelingstijd
ongeveer 36 tot 48 uur

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
TT (Cytion catalogusnummer 305027)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1774

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
Calcitonine, carcino-embryonisch antigeen (CEA)

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
Ham's F12K-medium, w: 2,0 mM L-glutamine, w: 2,0 mM natriumpyruvaat, w: 2,5 g/L NaHCO3 (Cytion-artikelnummer 820608a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS, 1% NEAA en 1mM natriumpyruvat
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Splitsingsverhouding
1 tot en met 3
Zaaidichtheid
1 tot 3 × 10⁴ cellen/cm²
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Breng de cellen na het ontdooien uit op een celdichtheid van 5 × 10⁴ cellen/cm² en laat ze ten minste 24 uur hechten voordat u de eerste mediumverversing uitvoert. Opmerking: Het kan 24–72 uur na het ontdooien duren voordat de calcitonineproductie een stabiel secretieniveau bereikt.
Ontdooien en kweken

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
77 jaar
Etnische afkomst
Europese