hCMEC/D3

Linia komórkowa HCMEC/D3 reprezentuje unieśmiertelnioną linię ludzkich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu, szeroko wykorzystywaną w badaniach bariery krew-mózg (BBB). Ta linia komórkowa została wygenerowana poprzez transdukcję pierwotnych ludzkich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu wektorem lentiwirusowym wyrażającym ludzką odwrotną transkryptazę telomerazy (hTERT), kluczowy enzym utrzymujący długość telomerów, a tym samym promujący długowieczność komórek bez przekształcania ich fenotypu. Wprowadzenie hTERT pomaga tym komórkom ominąć starzenie replikacyjne, które ogranicza żywotność komórek pierwotnych, umożliwiając trwałe rozmnażanie w hodowli.

Komórki HCMEC/D3 zachowują kluczowe fizjologiczne i morfologiczne cechy pierwotnych komórek śródbłonka mózgowego, co czyni je cennym modelem do badań in vitro BBB. Obejmują one ekspresję białek ścisłego połączenia, takich jak klaudyna-5, okludyna i zonula occludens-1, które są krytyczne dla utrzymania integralności bariery. Komórki te wykazują również ekspresję różnych transporterów i receptorów typowych dla śródbłonka mózgowego, co wspiera ich wykorzystanie w badaniach związanych z dostarczaniem leków i zaburzeniami nerwowo-naczyniowymi. Zdolność HCMEC/D3 do tworzenia szczelnej monowarstwy o wysokiej oporności elektrycznej podkreśla ich przydatność do testów przepuszczalności BBB.

Badania wykorzystujące komórki HCMEC/D3 obejmują szeroki zakres zastosowań, w tym badanie patologii mózgu, takich jak udar, stwardnienie rozsiane i przerzuty raka do mózgu. Ich kompatybilność z różnymi technikami biologii molekularnej czyni je również doskonałym narzędziem do badania odpowiedzi komórek śródbłonka na bodźce zapalne, stres ścinający i substancje neurotoksyczne. Ta linia komórkowa zapewnia solidną, powtarzalną platformę do analizy zdarzeń molekularnych na poziomie śródbłonka mózgowego, przyczyniając się do cennego wglądu w złożoność zdrowia i choroby układu nerwowo-naczyniowego.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym