hCMEC/D3

A linhagem celular HCMEC/D3 é uma linhagem de células endoteliais microvasculares cerebrais humanas imortalizadas, amplamente utilizada no estudo da barreira hematoencefálica (BHE). Essa linha celular foi gerada por meio da transdução de células endoteliais microvasculares cerebrais humanas primárias com um vetor lentiviral que expressa a transcriptase reversa da telomerase humana (hTERT), uma enzima crucial para manter o comprimento dos telômeros e, assim, promover a longevidade celular sem transformar o fenótipo celular. A introdução da hTERT ajuda essas células a contornar a senescência replicativa que limita a vida útil das células primárias, permitindo a propagação sustentada em cultura.

As células HCMEC/D3 mantêm características fisiológicas e morfológicas essenciais das células endoteliais cerebrais primárias, tornando-as um modelo valioso para estudos in vitro da BHE. Isso inclui a expressão de proteínas de junções apertadas, como claudina-5, ocludina e zonula occludens-1, que são fundamentais para manter a integridade da barreira. As células também expressam vários transportadores e receptores típicos do endotélio cerebral, o que justifica seu uso em estudos relacionados à administração de medicamentos e distúrbios neurovasculares. A capacidade das células HCMEC/D3 de formar uma monocamada compacta com alta resistência elétrica ressalta sua adequação para ensaios de permeabilidade da BHE.

Pesquisas que utilizam células HCMEC/D3 abrangem uma ampla gama de aplicações, incluindo a investigação de patologias cerebrais, como acidente vascular cerebral, esclerose múltipla e metástase de câncer no cérebro. Sua compatibilidade com diversas técnicas de biologia molecular também as torna uma excelente ferramenta para o estudo das respostas das células endoteliais a estímulos inflamatórios, tensão de cisalhamento e substâncias neurotóxicas. Essa linhagem celular oferece uma plataforma robusta e reproduzível para a análise dos eventos moleculares no nível endotelial cerebral, contribuindo com insights valiosos sobre as complexidades da saúde e das doenças neurovasculares.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.