Langsung ke isi
hCMEC/D3
Tisu
Otak, lobus temporal, pembuluh darah mikro
Penyakit
Endotel mikrovaskular serebral normal (diimortalkan dengan hTERT dan SV40; model sawar darah-otak; tidak bersifat tumorigenik)
Lokasi metastasis
Tidak berlaku (garis sel endotel otak normal; bukan sampel tumor)
Sinonim
HCMEC/D3, CMEC/D3, human Cortical Microvessels Endothelial Cells/D3

Dokumen

hCMEC/D3

Cell line · Nomor produk 305024

Garis sel HCMEC/D3 merupakan garis sel endotel mikrovaskular serebral manusia yang diimortalkan, yang secara luas digunakan dalam penelitian tentang sawar darah-otak...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim

Penyesuaian / Rekomendasi

Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
  • CoA
1

01Informasi umum

Deskripsi

Garis sel HCMEC/D3 merupakan garis sel endotel mikrovaskular otak manusia yang diawetkan, yang digunakan secara luas dalam studi sawar darah otak (BBB). Garis sel ini dihasilkan melalui transduksi sel endotel mikrovaskular otak manusia primer dengan vektor lentiviral yang mengekspresikan human telomerase reverse transcriptase (hTERT), enzim penting untuk mempertahankan panjang telomer dan dengan demikian meningkatkan umur sel tanpa mengubah fenotipe sel. Pengenalan hTERT membantu sel-sel ini untuk melewati penuaan replikasi yang membatasi umur sel primer, sehingga memungkinkan perbanyakan yang berkelanjutan dalam kultur.

Sel HCMEC/D3 mempertahankan karakteristik fisiologis dan morfologis utama dari sel endotel otak primer, menjadikannya model yang berharga untuk studi in vitro BBB. Ini termasuk ekspresi protein persimpangan yang ketat seperti claudin-5, occludin, dan zonula occludens-1, yang sangat penting untuk menjaga integritas penghalang. Sel-sel ini juga mengekspresikan berbagai transporter dan reseptor yang khas pada endotel serebral, mendukung penggunaannya dalam penelitian yang berkaitan dengan penghantaran obat dan gangguan neurovaskular. Kemampuan HCMEC/D3 untuk membentuk monolayer yang rapat dengan hambatan listrik yang tinggi menggarisbawahi kesesuaiannya untuk uji permeabilitas BBB.

Penelitian yang menggunakan sel HCMEC/D3 telah mencakup berbagai aplikasi, termasuk investigasi patologi otak seperti stroke, multiple sclerosis, dan metastasis kanker ke otak. Kompatibilitasnya dengan berbagai teknik biologi molekuler juga menjadikannya alat yang sangat baik untuk mempelajari respons sel endotel terhadap rangsangan inflamasi, tegangan geser, dan zat neurotoksik. Garis sel ini menyediakan platform yang kuat dan dapat direproduksi untuk membedah peristiwa molekuler pada tingkat endotel otak, memberikan kontribusi wawasan yang berharga ke dalam kompleksitas kesehatan dan penyakit neurovaskular.

Tisu
Otak, lobus temporal, pembuluh darah mikro
Penyakit
Endotel mikrovaskular serebral normal (diimortalkan dengan hTERT dan SV40; model sawar darah-otak; tidak bersifat tumorigenik)
Lokasi metastasis
Tidak berlaku (garis sel endotel otak normal; bukan sampel tumor)
Aplikasi
Penelitian tentang sawar darah-otak (BBB); peradangan saraf; pengiriman obat ke SSP dan permeabilitas; migrasi transendotelial; biologi sambungan rapat (claudin-5, occludin, ZO-1); pemodelan penyakit saraf; respons terhadap tegangan geser; pengujian neurotoksisitas
Sinonim
  • HCMEC/D3
  • CMEC/D3
  • human Cortical Microvessels Endothelial Cells/D3

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Seks
Perempuan
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This human microvascular endothelial cell line (hCMEC/D3) contains lentiviral constructs encoding SV40 T-Antigen or hTERT, supporting stable immortalization. The insert is integrated into primary endothelial cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Mirip endotel (batu bata)
Jenis sel
Sel endotel
Waktu penggandaan
sekitar 24 hingga 36 jam

04Pengidentifikasi

Referensi
hCMEC/D3 (nomor katalog Cytion 305024)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_U985

05Ekspresi dan kerentanan

Virus
Transforman: Virus Simian 40 (SV40)

06Penanganan dan budidaya

Media kultur
EGM -2 MV Media Pertumbuhan Sel Endotel Mikrovaskular-2 BulletKit (dari Lonza, nomor katalog Lonza CC-3202)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan Media Basal EBM-2 yang disediakan seperti yang direkomendasikan oleh produsen
Reagen disosiasi
Accutase atau Trypsin-EDTA 0,25% (singkat; jangan sampai terjadi trypsinisasi berlebihan)
Perbanyakan sel
Buang medium, cuci dengan PBS tanpa Ca²⁺/Mg²⁺, tambahkan Accutase (3–5 menit pada 37°C), netralkan dengan media lengkap, sentrifugasi pada 300×g selama 5 menit, tanam kembali dengan kepadatan 1–2 × 10⁴ sel/cm² pada labu yang dilapisi kolagen.
Rasio pemisahan
1 sampai 3
Kepadatan penanaman
1 hingga 2 × 10⁴ sel/cm² (pada permukaan yang dilapisi kolagen I)
Pergantian cairan
Setiap 1 hingga 2 hari
Pencairan dan pembiakan

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan 50% media basal + 40% FBS + 10% DMSO, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

08Donatur

Usia donor
Dewasa
Etnis
Tidak ditentukan