hCMEC/D3

A linha celular HCMEC/D3 representa uma linha celular endotelial microvascular cerebral humana imortalizada, amplamente utilizada no estudo da barreira hemato-encefálica (BBB). Esta linha celular foi gerada através da transdução de células endoteliais microvasculares cerebrais humanas primárias com um vetor lentiviral que exprime a transcriptase reversa da telomerase humana (hTERT), uma enzima crucial para manter o comprimento dos telómeros e, assim, promover a longevidade celular sem transformar o fenótipo celular. A introdução da hTERT ajuda estas células a contornar a senescência replicativa que limita o tempo de vida das células primárias, permitindo a propagação sustentada em cultura.

As células HCMEC/D3 mantêm as principais caraterísticas fisiológicas e morfológicas das células endoteliais cerebrais primárias, o que as torna um modelo valioso para estudos in vitro da BHE. Estas caraterísticas incluem a expressão de proteínas de junção apertada, como a claudina-5, a ocludina e a zonula occludens-1, que são essenciais para manter a integridade da barreira. As células também expressam vários transportadores e receptores típicos do endotélio cerebral, apoiando a sua utilização em estudos relacionados com a administração de fármacos e doenças neurovasculares. A capacidade das HCMEC/D3 para formar uma monocamada apertada com elevada resistência eléctrica sublinha a sua adequação para ensaios de permeabilidade da BBB.

A investigação que utiliza células HCMEC/D3 abrangeu uma vasta gama de aplicações, incluindo a investigação de patologias cerebrais como o acidente vascular cerebral, a esclerose múltipla e as metástases de cancro no cérebro. A sua compatibilidade com várias técnicas de biologia molecular torna-as também uma excelente ferramenta para o estudo das respostas das células endoteliais a estímulos inflamatórios, tensão de cisalhamento e substâncias neurotóxicas. Esta linha celular fornece uma plataforma robusta e reprodutível para dissecar os eventos moleculares ao nível do endotélio cerebral, contribuindo com informações valiosas sobre as complexidades da saúde e da doença neurovascular.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia