hCMEC/D3

HCMEC/D3 细胞系是一种永生化的人脑微血管内皮细胞系，广泛用于血脑屏障（BBB）的研究。这种细胞系是通过用表达人端粒酶逆转录酶（hTERT）的慢病毒载体转导原代人脑微血管内皮细胞而产生的，人端粒酶逆转录酶是一种维持端粒长度的关键酶，因此能在不改变细胞表型的情况下延长细胞寿命。引入 hTERT 有助于这些细胞绕过限制原代细胞寿命的复制衰老，使其能够在培养物中持续繁殖。

HCMEC/D3细胞保留了原代脑内皮细胞的关键生理和形态特征，使其成为体外研究BBB的重要模型。这些特征包括表达紧密连接蛋白，如 claudin-5、occludin 和 zonula occludens-1，它们对维持屏障完整性至关重要。这些细胞还表达各种典型的脑血管内皮细胞转运体和受体，从而支持将它们用于与药物输送和神经血管疾病相关的研究。HCMEC/D3 能够形成具有高电阻的紧密单层，这突出表明它们适合用于 BBB 渗透性检测。

利用 HCMEC/D3 细胞进行的研究涵盖了广泛的应用领域，包括研究中风、多发性硬化症等脑部病症以及癌症向脑部的转移。它们与各种分子生物学技术的兼容性也使其成为研究内皮细胞对炎症刺激、剪切应力和神经毒性物质反应的绝佳工具。该细胞系为剖析脑内皮水平的分子事件提供了一个稳健、可重复的平台，有助于深入了解神经血管健康和疾病的复杂性。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。

有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。