hCMEC/D3

La linea cellulare HCMEC/D3 rappresenta una linea immortale di cellule endoteliali microvascolari cerebrali umane, ampiamente utilizzata nello studio della barriera emato-encefalica (BBB). Questa linea cellulare è stata generata attraverso la trasduzione di cellule endoteliali microvascolari cerebrali umane primarie con un vettore lentivirale che esprime la trascrittasi inversa della telomerasi umana (hTERT), un enzima cruciale per il mantenimento della lunghezza dei telomeri e quindi per promuovere la longevità cellulare senza trasformare il fenotipo delle cellule. L'introduzione di hTERT aiuta queste cellule a superare la senescenza replicativa che limita la durata di vita delle cellule primarie, consentendo una propagazione prolungata in coltura.

Le cellule HCMEC/D3 mantengono le principali caratteristiche fisiologiche e morfologiche delle cellule endoteliali cerebrali primarie, che le rendono un modello prezioso per gli studi in vitro sulla BBB. Tra queste, l'espressione di proteine della giunzione stretta come la claudina-5, l'occludina e la zonula occludens-1, fondamentali per mantenere l'integrità della barriera. Le cellule esprimono anche diversi trasportatori e recettori tipici dell'endotelio cerebrale, a sostegno del loro utilizzo in studi relativi alla somministrazione di farmaci e ai disturbi neurovascolari. La capacità delle HCMEC/D3 di formare un monostrato stretto con un'elevata resistenza elettrica sottolinea la loro idoneità per i saggi di permeabilità della BBB.

La ricerca che utilizza le cellule HCMEC/D3 ha coperto un'ampia gamma di applicazioni, tra cui lo studio di patologie cerebrali come l'ictus, la sclerosi multipla e le metastasi del cancro al cervello. La loro compatibilità con varie tecniche di biologia molecolare le rende inoltre uno strumento eccellente per studiare le risposte delle cellule endoteliali agli stimoli infiammatori, allo stress da taglio e alle sostanze neurotossiche. Questa linea cellulare fornisce una piattaforma robusta e riproducibile per la dissezione degli eventi molecolari a livello dell'endotelio cerebrale, contribuendo a fornire preziose indicazioni sulla complessità della salute e della malattia neurovascolare.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia