hCMEC/D3

HCMEC/D3 細胞系是一種永生化的人類腦微血管內皮細胞系，廣泛應用於血腦屏障（BBB）的研究。 該細胞系是透過將表達人類端粒酶逆轉錄酶（hTERT）的慢病毒載體轉導至原代人類腦微血管內皮細胞而建立的；hTERT 是一種維持端粒長度的關鍵酶，能促進細胞長壽，同時不會改變細胞表型。 hTERT 的導入有助於這些細胞繞過限制原代細胞壽命的複製性衰老，使其能在培養中持續增殖。

HCMEC/D3 細胞保留了原代腦內皮細胞的關鍵生理與形態特徵，使其成為體外研究血腦屏障（BBB）的寶貴模型。這些特徵包括緊密連接蛋白（如 claudin-5、occludin 和 zonula occludens-1）的表達，這些蛋白質對於維持屏障完整性至關重要。 這些細胞亦表達多種腦內皮細胞特有的轉運蛋白和受體，因此適用於藥物遞送及神經血管疾病相關的研究。HCMEC/D3 細胞能形成具有高電阻的緊密單層，這進一步凸顯其適用於血腦屏障通透性檢測。

利用 HCMEC/D3 細胞進行的研究涵蓋廣泛的應用領域，包括中風、多發性硬化症及癌症腦轉移等腦部病理的探究。該細胞與各種分子生物學技術的相容性，亦使其成為研究內皮細胞對發炎刺激、剪切應力及神經毒性物質反應的絕佳工具。 該細胞系為剖析腦內皮層級的分子事件提供了穩健且可重複的實驗平台，為理解神經血管健康與疾病的複雜性提供了寶貴見解。

37°C，5% CO_₂，加濕環境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。

為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。

冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。

在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。

詳情請參閱我們的 《保固聲明》。