MCA-3D

Linia komórkowa MCA-3D pochodzi z pierwotnych hodowli naskórka myszy, które wykazują oporność na końcowe różnicowanie indukowane wapniem. Komórki te były początkowo traktowane czynnikami rakotwórczymi N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyną (MNNG) lub 7,12-dimetylobenz[a]antracenem (DMBA), a następnie poddawane działaniu 12-O-tetradekanoiloforbol-13-octanu (TPA). Odporność na końcowe różnicowanie oceniano poprzez podniesienie poziomu wapnia w pożywce hodowlanej do 1,2 mM, co selektywnie pozwala na wzrost transformowanych komórek, podczas gdy normalne komórki zwykle ulegają końcowemu różnicowaniu i śmierci.

Linia komórkowa MCA-3D wykazuje morfologię nabłonkową i tworzy dobrze zdefiniowane kolonie w hodowli. Analiza ultrastrukturalna ujawnia, że komórki MCA-3D zawierają włókna keratynowe i desmosomy, które wskazują na ich nabłonkowe pochodzenie i sugerują utrzymanie pewnego stopnia normalnego różnicowania keratynocytów. Jednak dokładna obfitość tych struktur może się różnić w zależności od subpopulacji w obrębie linii.

Komórki MCA-3D zostały przetestowane pod kątem nowotworowości poprzez podskórne wstrzyknięcie syngenicznym noworodkom Balb/c, z wynikami wskazującymi, że linia ta jest nienowotworowa, nawet po długotrwałej hodowli w warunkach wysokiego stężenia wapnia. Dodatkowo, komórki MCA-3D nie rosną w miękkim agarze, co dodatkowo potwierdza ich nienowotworowy fenotyp. Testy biochemiczne na aktywność transpeptydazy gamma glutamylowej (GGT) i aktywność transglutaminazy wykazały, że komórki MCA-3D są ujemne pod względem GGT, a ich aktywność transglutaminazy nie koreluje z potencjałem nowotworowym, co jest zgodne z ich klasyfikacją nienowotworową.

Ogólnie rzecz biorąc, linia komórkowa MCA-3D służy jako model do badania wczesnych etapów kancerogenezy i czynników, które wpływają na progresję od zmian przednowotworowych do w pełni złośliwych guzów.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym